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Vero细胞培养接种工艺技术

 发布时间:2021-11-23 点击量:923

Vero细胞近年来作为新时代制药产业的热门细胞,成为转基因、蛋白、抗体类制药企业普遍使用使用的载体工具。使用细胞生物反应器进行Vero细胞的规模化增殖的接种工艺如下:


一、实验前准备:
细胞∶Vero 细胞(ATCC级别的 )、DMEM培养基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌滤膜、CT-3微载体、2L实验室生物反应器,5L搏旅/楚怡细胞培养生物反应器、摇瓶、细胞培养瓶、水浴锅。

BioCore QC台式细胞生物反应器(玻璃).jpg

二、接种实验方法
1.微载体的预处理和灭菌: 接种实验前的微载体需要用无钙、镁离子的PBS磷酸盐缓冲液进行吸胀、洗涤,之后进行高压灭菌处理,工艺控制参数为:吸胀质量浓度不超过50 g·L-1,灭菌温度121 ℃,20 min。


2.转瓶接种操作:
将培养瓶内的 Vero 细胞接种于500ML的转瓶内,CT-3 微载体浓度为 3g/L,并加入适量的混合牛血清的DMEM培养基,此时接种密度以2.0×10°cells/mL为宜。
在微载体细胞生长过程中,可适当补加微载体 2g/L,使微载体浓度达到 5g/L即可接种在5L细胞培养生物反应器中作为种子细胞进行培养。


3.规模扩培接种操作
当细胞生长到达一定密度时,将细胞及新的微载体一起转入大容积的微载体培养养反应器中,进行细胞培养。此过程的工艺参数为:温控: 37士0.1℃,溶解氧为 50%空气饱和度,搅拌器的转速维持在20~32 r/min即可。当细胞密度达 1.1×10'cells/mL时,即可进入下游环节进行产品生产。

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介于国外生物反应器成本高昂,售后服务不便,型号固定、货期长等因素,我国自主研发设备生产的生物反应器目前已广泛应用于制药生产、新药开发、蛋白研发、转基因产品等环节,一些国内生物反应器专业生产商甚至可根据客户要求的尺寸进行定制化操作,比如搏旅除生产固定型号规格外,还可以根据客户要求定制不同级别、规格的生物反应器、发酵罐主要用于微生物培养、种子制备、浮细胞培养、贴壁细胞培养、微载体培养等,实现了厂商直供,一罐多用,满足不同的用户需求。