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实验室细胞培养的仪器和实验室耗材有哪些?

 发布时间:2022-03-25 点击量:1690

用于动物细胞培养的实验室仪器设备和实验室耗材有很多种,进行动物细胞培养所需的基本设备如下:

设备

有益设备

有用的附加设备

振荡培养箱

生物安全柜

低温冷冻柜

显微镜

细胞计数

玻璃器皿清洗机

灭菌器

真空泵

菌落柜台

清洗仪器

二氧化碳培养箱

共聚焦显微镜

杀菌干燥箱

制备和质量控制

荧光激活细胞分选仪

离心机

温度记录


纯水机

细胞生物反应器


液氮罐

移液器和自动移液器


水浴锅




动物细胞培养实验室所需基本设备清单:

1. 无菌工作区/细胞培养罩(即层流罩或生物安全柜)

2. 培养箱(推荐使用潮湿的二氧化碳培养箱)

3. 水浴

4. 离心机

5. 冰箱和冰柜 (–20°C)

6. 细胞计数器(例如自动细胞计数器或血细胞计数器)

7. 倒置显微镜

8. 液氮 (N 2 ) 冷冻箱或低温储存容器

9. 灭菌器(即高压灭菌器)



细胞培养设备

1 、细胞培养所需的无菌工作区:

§ 为了保持清洁的细胞培养工作,如果可能,有必要准备一个单独的房间或空间。

§ 这个房间应该是密闭的,另外需要配备一个气流柜,已提供洁净的空气,一些实验室还会采用HEPA空气过滤器。实验室必须是为洁培养工作二设计,严格限制在细胞培养实验室内或附近培养原代动物组织和微生物。

§ 实验室外套应放在实验室入口处,不得在实验室外使用。

§ 生物安全柜既可以提供无菌条件,而且还可以控制传染性飞溅物或气溶胶

§ 为满足多样化的研究需要,生物安全柜一般有I、II、III类。

§ I 类层安全柜为实验室工作人员和环境提供了基本水平的保护,但它们不能保护培养物免受污染。 它们在设计和气流特性方面与化学通风柜基本相同。

§ 对于涉及 BSL-1、2 和 3 材料的工作或者细胞培养时为了处理有害物质(例如,灵长类动物培养物、病毒感染培养物、放射性同位素、致癌或有毒试剂),应使用 II 类生物安全柜。

§ 清洁工作台:垂直层流或水平层流洁净工作台将经过 HEPA 过滤的空气从机柜后部穿过工作表面有助于保护样品而不是工作人员。

2.振荡培养箱

§ 为了在 30-40 0 C下为细胞生长提供合适的温度环境,需要一个培养箱。

§ 根据培养的细胞类型,孵育温度会有所不同。

§  CO2 振荡培养箱时一种可以自动进行控温、湿度和气体调节的培养箱,可以使培养基中,CO2 的浓度与碳酸氢钠保持平衡。细胞培养时,一般保持培养箱中保持 2-5% CO2 气体含量

3.用于标本保存的超低温冰箱和低温冰柜(-20 ° C) :

§ 冰箱和冰柜对于在 2–8°C 下储存液体培养基以及在 –5°C 到 –20°C 下储存酶和某些培养基成分都非常重要。

§  要储存培养基和缓冲液,需要冰箱或冷藏室。 

§ 需要低温冰箱来保存预先分装的血清、营养物质和抗生素。 

§ 低温储存

§ 随着传代次数的增加,连续培养的细胞系遗传不稳定的可能性很大,因此,有必要制备细胞的工作原液并保存在低温储存中。

§ 需要注意的是,细胞不应储存在 20 o C 或 -80 o C 的冰箱中,因为当它们不在这些温度下储存时,它们的活力会降低。

4.显微镜:

§ 检查细胞一般使用倒置显微镜即可。

§ 尽管染色体分析或放射自显影工作需要非常高质量的显微镜,但放大倍数为 X100 的简单的光学显微镜足以在血细胞计数器中进行常规细胞计数。

、组织培养器皿:

§ 多种组织培养塑料器皿,最常见的是经过特殊处理的聚苯乙烯。 

§ 少量的细胞培养一般25 cm2 或 75 cm2培养皿或细胞培养瓶中进行,而后再转移至摇瓶中,置于二氧化碳培养箱中扩培,大规模细胞培养还需要借助生物反应器等设备。

6.清洗消毒设施:

§ 玻璃器皿如移液器应浸泡在合适的清洁剂中,然后经过严格的洗涤程序,在干燥和灭菌之前用蒸馏水彻底浸泡。

§ 玻璃器皿如移液管、锥形瓶、烧杯(用铝箔覆盖)在 160°C 的热空气烘箱中消毒一小时。

§ 所有其他设备,如自动移液器吸头和瓶子(盖子松散连接)均通过 121 °C 高压灭菌 20 分钟进行灭菌。

7.制备或反渗透装置:

§ 为了准备培养基和冲洗玻璃器皿,需要双蒸或反渗透水供应。

§ 应定期检查双蒸水的 pH 值,因为在某些情况下可能会有所不同。

§ 使用的水质量的变化可能会导致结果的变化,因此有必要使用单一来源的水。

§ 通过高压灭菌将水在 121 °C 下灭菌 20 分钟。

8.过滤除菌

§ 不能高压灭菌的培养基必须通过孔径为 0.22 μm 的膜过滤器进行灭菌。

9.离心机

§ 为了增加细胞浓度或洗去试剂,细胞悬液需要进行离心操作

§ 可以使用的离心机有台式离心机、小型离心机、落地式离心机和冷冻离心机等。

其他扩展设备和附加用品:

§ 用于动物培养的其他附加实验室仪器设备和实验室耗材如下:

§ 蠕动泵货真空泵

§ PH计

§ 细胞生物反应器【大规模培养】

§ 共聚焦显微镜

§ 流式细胞仪

§ 细胞培养瓶

§ 细胞培养皿

§ 滚瓶或摇瓶、细胞培养瓶

§ 移液器和移液器吸头

§ 废物容器

§ 培养基、血清和试剂

§ 细胞

1. pH计:

§ PH计是一种计算溶液中氢离子(酸度或碱度)活度的电子仪器。

§ pH 计必须包括连接到 pH 响应电极和参考(不变)电极的电压表。

§ pH 响应电极通常是玻璃,汞-氯化亚汞(甘汞)电极通常是参考电极,但有时也使用银-氯化银电极。

2.共聚焦显微镜:

§ 共聚焦显微镜是一种特殊类型的标准荧光显微镜(也称为宽场荧光显微镜),它使用特定的光学组件产生用荧光探针染色的材料的高分辨率图像。

3 . 流式细胞仪:

§ 流式细胞术是一种细胞分析方法,在 1950 年代用于确定流体流中的细胞体积,当它们在观察孔前流动时,流体流会快速循环。

§ 流体、光学和电子是流式细胞仪的三个主要组成部分。

§ 样品从样品管到流动池的传输是流式细胞仪的流体系统的功能。

§ 样品要么被分选(在细胞分选机的情况下),要么在通过流通池(并通过激光)后被运送到废物中。

§ 光学系统组件包括激发光源、透镜和用于在仪器周围捕获和移动光的滤光片以及光电流产生检测系统。

4 . 细胞培养容器:

§ 所有的培养细胞的容器初都是玻璃的。

§ 与塑料相比,玻璃的缺点包括重量大、成本高、清洁劳动强度大和显微镜观察效果差。

§ 1960 年代为聚苯乙烯开发了表面处理技术,使塑料容器能够代替玻璃用于大多数细胞培养应用。

培养瓶瓶说明

生长面积(cm 2 )

推荐工作体积 (ml)

细胞产量

T-25

25

5-10

2.5×10 6

T-75

75

15-25

7.5×10 6

T-150

150

30-50

15.0 X 10 6

T-175

175

35-60

17.5 X 10 6

T-225

225

45-75

22.5 X 10 6

A.细胞培养皿:

§ 细胞培养皿提供了佳的经济性和进入生长表面的途径。

§ 它们应该与二氧化碳振荡培养箱一起使用。

§ 大多数制造商提供四种培养皿35 毫米、60 毫米、100 毫米和 150 毫米。

§ 细胞培养皿主要用于培养贴壁细胞

细胞培养皿说明

生长良好 (cm 2 )

工作容积(ml)

细胞产量

96孔

0.32

0.1-0.2

0.32×10 5

48孔

1.00

0.3-0.6

0.8×10 5

24孔

1.88

0.5-1.2

1.9×10 5

12孔

3.83

1.0-2.4

3.8×10 5

6孔

9.40

2.0-3.0

9.5×10 5


B 滚瓶:

§ 为了增加贴壁细胞数量一般使用滚瓶、摇瓶培养,细胞培养瓶的使用与烧瓶基本相同但劳动力大大减少。

滚瓶的说明

生长面积(cm 2

工作容积(mL)

 细胞产量

小的

490

100-150

4.9×10 5

标准

850

170-250

8.5×10 5

制药

1750

340-500

17.5 X 10 5


C . 移液器和移液管

§ 血清移液管是一种相对常见的实验室仪器,用于转移毫升体积的液体。

§ 为了计算被吸出或分配的液体体积,血清移液管通常沿其侧面有刻度

§ 这些仪器最常与移液器分液器一起使用,通过产生部分真空来增强液体转移。

§ 根据您想要通过的体积量,相同的移液器分液器可与多种血清移液器尺寸一起使用。

§ 血清移液管通常是可消毒和可重复使用的,可以是塑料的、无菌的、一次性的或玻璃的。

§ 对于液体的转移可使用移液器来进行操作

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