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BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的优缺点对比

 发布时间:2022-06-28 点击量:304
目前实验室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三种: BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 

BCA 蛋白定量 的实验原理是在碱性条件下,H | NH2----C-COOH | R 将Cu²+还原为CU+与 BCA 结晶为紫色的化合物,再通过测定 562 nm波长OD值来判定还原剂的含量。


下列表分别对两种实验方法做以对比:



通过上表中的的对比,我们不难看出Bradford实验法的速度比较快,平常BCA 蛋白定量 的孵育时间大约30分钟甚至更长,而采用Bradford蛋白定量法则需要几分钟即可完成实验。


虽然其标准曲线的线性拟合程度不如BCA定量法,但它的二项式契合度却较高。
(下图显示为:二项式的标准曲线制作方法)



除此之外,Bradford 蛋白定量还有一个小小的缺陷,那就是它比较容易受高浓度的去垢剂影响,比如需要SDS的实验浓度低于0.01%,TRITON X-100的实验浓度低于0.005%等。
解决的办法是:使用与Bradford 兼容的去垢剂,从而匹配到相应的实验浓度即可。

      Bradford蛋白定量实验虽然实验在制作二项式标线和公式计算较繁琐,但如果能成功破解以上三个问题,那么Bradford法对比BCA法来说还是有不少优势的,比如可以节省很多时间等。对于追求实验效率的实验员来说,熟练掌握Bradford实验法是个不错的选择。 

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