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细胞转染效率低的原因

 发布时间:2022-11-18 点击量:261
细胞转染效率低的原因
 细胞转染实验是指将DNA、RNA等外源物质通过电转染或化学转染的方式导入至细胞内的实验方法。不同的细胞系转染难度也各部相同,尤其是对生长条件要求较为苛刻的细胞,比如原代细胞的转染效率会远低于其他细胞。这里, 盘点了一下那些可能导致细胞转染效率低的原因、转染试剂选择指南,以便提升您的细胞转染效率。 

一、实验条件和操作方法不合规
正常情况下,做细胞转染实验前需要充足的准备,比如:细胞、DNA、转染试剂、培养基等。除了合规的实验条件以外,还有较为重要的就是实验操作方法,实验是一个较为严谨的过程,所以每一步的操作步骤都要严格按照操作规程和说明书进行操作,才能避免人为原因所造成的失误。
二、细胞活性不足,细胞密度不足
细胞的生长状态对细胞的转染效率的影响较大,细胞长势弱或者细胞的铺板密度过低,可能会转染试剂的细胞毒性而导致转染效率过低,甚至转染失败。因此细胞转染时机应在细胞的对数生长期,细胞的铺板密度一般以90%-95左右为宜。
三、转染的DNA或RNA浓度过低、质量过低
如果转染质粒的DNA或RNA的纯度不够,其中的其它外源物质可能会干扰细胞造成轻微的细胞毒性,进而影响到细胞的转染效率。正常情况下,用于细胞转染的质粒浓度应大于500ng/ul。在做RNA转染实验时,可以尝试Lip RNAiMAX Transfection Reagent试剂,这类试剂的细胞毒性较低,转染效率较高,并且操作简单易于优化,比较适用于高通量转染。

四、细胞本身转染难度大 
细胞转染效率低的原因还跟需要转染的细胞类型有关。细胞类型的不同,转染效率也会有较大差别。尤其是MSC细胞、PSC干细胞、神经干细胞、原代细胞等, 对于一些较难转染的细胞,可以尝试高效率的转染试剂或者使用其他转染方法,灵活变化。比如:使用Lipofectamine  Stem试剂。
五、转染试剂选择不当
转染试剂的选择时保证细胞转染效率的关键,低质量的转染试剂可能具有较强的细胞毒性,操作过程繁杂,出现转染效果不稳定等现象,遇到难转细胞系甚至出现转染失败。实验室里经常使用的LIP2000,LIP3000的转染试采用脂质体纳米颗粒技术,能够将转染的效率提升10倍作用,比较适合用于HEK293、原代细胞、干细胞等难以转染的细胞类型,并且还具有可重复性。
        以上总结的是一些常见的影响细胞转染效率的因素,可供实验参考,更多关于细胞转染效率的原因 、LIP3000、LIP2000相关产品需求可进入苏州阿尔法生物网站。