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外泌体制造需要哪些实验室设备

 发布时间:2023-01-31 点击量:423

 外泌体是蛋白质、脂质和核酸的天然载体,在细胞间通讯中起着至关重要的作用。外泌体包含各种膜蛋白,例如内体相关蛋白(Alix、Tsg101 和 Rab 蛋白)、四跨膜蛋白(CD63、CD81、CD82、CD53 和 CD37)和脂筏相关蛋白(糖基磷脂酰肌醇和 flotillin)。随着近年来生物技术、实验室设备的不断发展,外泌体有着广泛的应用前景,包括药物发现、配体筛选和靶向药物递送。

外泌体蛋白

  进而即用型、高质量的功能性外泌体的需求也越来越显明,这种工业外泌体生产需要通过大规模外泌体制备和纯化来实现。

外泌体制备过程主要分为以下几个关键步骤:

1.上游生产 —— 用于外泌体制造的细胞系的培养和扩增。选择特定的细胞系它进行细胞的传代培养和培养扩增才能产生大量用于外泌体生产的细胞。通常,规模化扩培,可以使用生物反应器进行分批补料培养,细胞培养时采用无血清培养基可用于减少污染并有助于外泌体纯化。

2.外泌体分离和纯化——当前外泌体的分离方法主要包括:差速离心法、TFF切向流过滤法、密度梯度离心、空间排阻色谱法(SEC)、聚合物沉淀和免疫亲和等方法。为了提高外泌体的浓度和质量,超速离心、微滤法、空间排阻色谱 (SEC)法 和免疫亲和等技术多用于外泌体纯化。

3.外泌体分析——为了清楚了解您的外泌体质量、大小、形态、特点还需要对外泌体进行进一步分析研究,在外泌体表征一般会使用流式细胞(FACS)多色分析、凝胶电泳western blot(WB)、ELISA等标记分析和组织学分析。外泌体质量大小、形态分析主要使用的实验设备包括、纳米粒度仪、透射电子显微镜 (TEM)、纳米粒子跟踪分析仪 (NTA)等。

4.冻干外泌体—— 虽然实验室中常规的外泌体存储条件为4℃、-20℃、-80℃。 但外泌体存储在-80°C将不利于其运输及应用,而采用外泌体冻干技术不仅可以在室温条件下稳定保存还可以改善药物递送载体脂质体的长期稳定性。

外泌体制备

外泌体制备过程中常用的实验室设备

    传统的外泌体产生的细胞作为静态系统在烧瓶中培养,这限制了培养环境参数的控制和进一步提高产量。所以大规模的外泌体制备或者外泌体工业化生产常使用动态培养系统,比如:会使用摇瓶、旋转瓶、滚瓶和生物反应器作为可选的外泌体制造设备。

    由于在生物反应器中配置了稳定可靠的动态监控系统,可以实时控制 CO2、O2、pH 值等培养环境. 不仅在培养规模上有所扩展,而且细胞培养环境也得到了较大的改善。尤其是微载体生物反应器采用了提升式搅拌桨,较大程度地降低了细胞剪切力,温控系统采用夹套和罐内双温度PID控制控温精准度可达0.1°C。

    苏州阿尔法生物提供生物反应器广泛应用于制备外泌体的细胞规模化扩培等外泌体制造的上游生产。同时提供,振荡培养箱、高速离心机、低速离心机、电泳仪、电泳槽、紫外分光光度计、流式细胞仪、纳米粒度仪等实验室设备广泛应用于外泌体制备的各个阶段