欢迎进入苏州阿尔法生物实验器材有限公司!
技术文章
首页 > 技术文章 > 多克隆抗体及抗体制备流程

多克隆抗体及抗体制备流程

 更新时间:2023-02-09 点击量:613

      抗体,又名免疫球蛋白 (Ig),是一种由 B 细胞产生的大型 Y 形糖蛋白,可在免疫防御中起主要作用。抗体与病原体的特定分子(即抗原)发生特异性结合。
    抗体以一个或者多个 Y 形单体存在,每个 Y 形单体由 4 条多肽链组成。每个 Y 形单体包含两条相同的重链(H)和两条相同的轻链(L),重链和轻链的序列和长度不同。Y 形单体的顶部包含可变区(V),也称抗原结合片段(F(ab))区。该区可与给定抗原上的表位特异性紧密结合。

   抗体的基本结构包含恒定区(C)和可结晶片段(Fc)区。这一区域对抗体的免疫应答功能非常重要。此外,将荧光染料和酶经共价键连接到抗体的 Fc 部位,可实现实验的可视化。
Y形抗体通过弹性的铰链区连接到中部。抗原结合发生在由免疫球蛋白重链(H)和轻链(L)组成的可变区(V)。抗体的基本结构由恒定区(C)组成。根据多肽序列的微小差异,抗体的轻链都可分为 kappa (κ) 型或 lambda (λ) 型。重链结构决定了各个抗体的总类。

   哺乳动物体内的抗体分为 5 种同种型:IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。各个同种型都有相应的结构。这些同种型因 Y 形结构的数量和重链种类而异。它们的生物学特性、功能区域以及结合不同抗原的能力有所不同。 

     由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就称为多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。除了抗原决定簇的多样性以外,同样一种抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。与单克隆抗体相比,大量多克隆抗体的生产相对快速且成本低廉。它们是非特异性的,因为它们能够识别任何一种抗原上的多个表位。

(二)优势和局限性

1.多克隆抗体的优势

(1)可以帮助增加 WB 信号,因为抗体将与多个表位结合。

(2)由于识别多个表位,多克隆抗体可以在 IP/ChIP 检测中提供更好的结果。

(3)更能容忍抗原的微小变化,例如多态性、糖基化异质性或轻微变性。

(4)当抗原的性质未知时很有用

(5)生产成本低,时间短

2.多克隆抗体的缺点

(1)更容易出现批次间的差异。

(2)多个表位使得检查免疫原序列是否存在任何潜在的交叉反应变得很重要。

(三)应用

一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体,包括变性—抗性的表位,所以,在深固定的样本中也会发挥效应,在石蜡包埋组织切片的染色中,多克隆抗体常选用。根据实验的不同需要,多克隆抗体应用于相应抗原的标记。此外,在农业生产中,多克隆抗体被用于农药残留现场监测;在临床应用中,多克隆抗体主要用于病原物的检测、疾病的诊断及治疗,如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。

三、单克隆抗体与多克隆抗体制备流程的比较

   经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞,经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株,最后进行细胞培养或将细胞注入到动物(一般为balb/c小鼠)腹腔中用腹水培养,收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原(纯度越高越好)直接注入到动物体内进行免疫,经过3至4次免疫,ELISA测其效价合格后,收集血液离心得到上清,纯化后即能得到多克隆抗体。
    

     苏州阿尔法生物供应单抗、双抗、多抗、一抗、二抗等抗体蛋白及蛋白免疫学相关的生物试剂和仪器设备。