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使用实验室仪器进行小鼠抗体生产技术

 发布时间:2023-02-10 点击量:231

小鼠抗体是科研实验中常用的一种抗体,它主要有IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM五种类型,下面小编就小鼠抗体分类及使用实验室仪器进行小鼠抗体生产技术做一下简单介绍:

小鼠抗体同种型/类、亚类和小鼠抗体同种型

与人类相同,小鼠有五种抗体同种型(IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM)。每个同种型都有不同的重链。同种型也称为类。抗体的另一个名称是免疫球蛋白,因此后缀“Ig"表示抗体类别和亚类。幼稚 B 细胞产生 IgM 和 IgD。在 B 细胞成熟过程中,通过同种型转换,成熟的 B 细胞将产生 IgG、IgA 或 IgE 同种型和亚类中的一种。不同的同种型在体内具有不同的半衰期,从 12 小时到 8 天不等 。

小鼠同种型基因

每条重链由可变区和恒定区组成。恒定区为不同的基因,尽管它们仅构成免疫球蛋白重链的一部分。
对于 IgG2a 和 IgG2c 同种型:具有 Igh1-b 等位基因的近交小鼠品系具有 IgG2c 同种型,而不是 IgG2a 。除其他同种型外,鼠类重链基因座仅具有这两种同种型基因中的一种。小鼠 IgG2a 支架有时用于重组抗体表达。
表 1 列出了小鼠抗体类别、子类、基因名称以及 NCBI 和 IMGT 基因数据库的链接。
小鼠抗体
表 2 列出了实验室中一些常用动物物种的不同同种型和亚类基因组。IgG2a 在某些小鼠品系中不存在,例如 C57BL、SJL 和 NOD 小鼠,它们具有 IgG2c。
抗体类型
小鼠抗体分子量
IgA、IgD 和 IgG 的重链具有一个具有三个免疫球蛋白 (Ig) 结构域的恒定区。例如小鼠IgA重链恒定区有344个氨基酸,小鼠IgG1恒定区有324个氨基酸。其他类型的重链可能具有不同数量的免疫球蛋白结构域。例如,分泌型和膜结合型 IgD 重链恒定区有两个 Ig 结构域。IgE 和 IgM 的重链有一个带有四个免疫球蛋白结构域的恒定区。小鼠 IgM 重链恒定区有 475 个氨基酸。来自所有同种型的重链都有一个带有单个免疫球蛋白结构域的可变区。
      每个免疫球蛋白结构域长约 110 个氨基酸。每条IgD和IgG重链约450个氨基酸,每条IgE和IgM重链约550个氨基酸。每条轻链(kappa 或 lambda)都有一个恒定的免疫球蛋白结构域和一个可变的免疫球蛋白结构域,大约有 211 到 217 个氨基酸。常见的 IgG 同种型的分子量为 150 KD。在还原条件下,每条重链约为50 KD,每条轻链约为25 KD。IgM 往往以五聚体或六聚体形式存在,其中 IgM 分子通过二硫键共价连接,从而产生 970 KD 的分子量。由于免疫球蛋白是糖基化的,因此表观分子量可能与标称分子量不同,有时甚至区别较大。
小鼠抗体生产
    小鼠是单克隆抗体产生的主要动物宿主,也是多克隆抗体产生的宿主。小鼠单克隆抗体生产也会涉及到实验室仪器、实验耗材及一些科研试剂。比如:用外源抗原以及常用的弗氏佐剂或新型水溶性 QuickAntibody对小鼠(通常是BALB/c小鼠, 进行免疫。小鼠单克隆抗体也可以通过将来自特定小鼠品系的未免疫脾细胞与自身抗体融合直接获得,如抗 SM Y12 抗体的情况。其他菌株,如 C57BL/6 、NMRI、C3H 和 SJL,以及其他佐剂如壳聚糖、LQ 或弗氏佐剂,以及过表达免疫原的埃文细胞,也可以使用。基因工程小鼠品系也可以作为宿主开发特异性抗体,例如通过β3Gn-T5基因敲除小鼠开发了一种对GM3神经节苷脂具有高结合特异性的IgG单克隆抗体。
      截至2022年6月5日,科研数据库列出了针对12039个人类基因、7144个小鼠基因、6475个大鼠基因以及来自其他156个物种的11079个基因的254742个小鼠单克隆抗体。
    大多数单克隆抗体是在小鼠体内产生的。通常使用抗小鼠二抗。 二抗多数为山羊抗小鼠。
苏州阿尔法生物实验器材有限公司提供的实验室仪器,实验耗材,生化试剂等广泛用于抗体纸杯、抗体生产等工艺。