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国产PCR仪购买时的注意事项

 更新时间:2023-02-21 点击量:615

国产PCR仪购买时的注意事项

PCR仪作为分子生物学相关实验的常规仪器,每年都有数千台的选购量,这两年一批国产PCR仪正在兴起。购买国产PCR仪需要考虑以下因素
1样本管的种类
现在主要有0.2ml和0.5ml两种,使用0.5ml PCR管的人员已经很少了,一是0.5ml PCR专用的薄壁管很少见,二是如果想要较大体积的PCR产物,可以通过多分几个0.2ml PCR管来实现。除非经常需要较大体积的PCR产物,否则可以不必考虑0.5ml型的PCR仪。
2 样本容量
种类很多,0.2ml的有96孔和48孔,0.5ml的有60孔和30孔,384孔等,当然还有一些其他组合:如0.2ml的48孔与0.5ml的30孔组合。购买96孔的还是48孔的PCR仪主要从经济上考虑,当然现在很多的厂家都有双48孔的产品,可以当两台48孔的PCR仪使用,也是一个比较好的选择,但48孔的PCR仪大都没有梯度功能。
 
一般来讲384孔都是用384孔的,对封膜的要求比较高,一定要采用专门用于PCR反应的膜,普通封板膜会影响PCR反应,造成实验失败。还有一些特别的PCR仪,如用于原位PCR的。
3 温度梯度功能
即不同列或不同行之间温度可以为不同的温度。这一功能对于固定PCR程序的检验人员来讲,可能用处不大,但对于经常进行不同基因扩增的研究人员来讲可以说是必须的。因为大家都知道PCR反应的复性温度是PCR成功的要素,PCR复性温度只有通过温度梯度实验来选择才是适宜的,你可以通过温度梯度实验了解到实验成功的复性温度范围,选择中间的一个温度点来保证实验的可重复性。朗基T20、T30 PCR仪就属于这一类。
 
通过理论计算得到的复性温度可以作为温度梯度实验的中心点来使用,如果认为这一温度就是好的复性温度则是错误的。因为复性的温度与缓冲液中的离子强度、DMSO的含量、Mg2+离子的浓度等都有直接关系,而研究人员一般并不了解所用的缓冲液中这些因素的含量或是在计算时都采用了缺省值。
 
另外,假设理论计算是正确的,但PCR仪的温度还有准确性和精确性的问题,一般都在±0.3至±0.5,也会影响到实验的重复性,通过实验来确定复性温度可以解决仪器准确性问题。这也是有些实验在一台仪器上做得很好,换一台仪器就不好的一个原因。当然温度梯度功能也可用于变性温度等的优化。
4计算控温与模块控温
模块控温是早期PCR仪所使用的控温方式,即所设定的温度为加热模块的温度,在变温过程中,快要达到目标温度时,PCR仪将升降温速率降低,让模块的温度慢慢接近目的温度,而不发生过冲。
 
计算控温也称为管式控温,即考虑的是PCR反应管中的温度,为了加快使反应管中温度达到目的温度,模块温度先过冲,然后在反应管中温度接近达到目的温度时调节到合适的温度,调节方式是通过理论计算与实验相结合而来的,与反应管中的反应液的体积有关,因此计算控温模式都需要实验人员输入反应液的体积。计算控温模式已经是普遍采用的方式了。
5 断电保护功能
这也是一个很有用的功能,特别是在中小城市,经常会发生短时间停电、保险丝融断以及空气开关跳闸等现象,如果没有这一功能,开机后不能自动接下来进行实验,往往会影响工作。
6热盖功能
热盖功能是各个厂家都有的,如果没有,怕是没人要了。热盖也分为可调式热盖和不可调式热盖。可调式热盖中又有力矩式可调热盖,主要解决在压紧热盖时用力过大及过小的问题。
7. 软件功能
仪器软件功能方面当然都可以设置PCR程序了,只是方便不方便的问题,用熟了便方便了,差别都不大。只是有的显示屏大些,可以画出一个温度变化曲线来,但大都是模拟的,意义也不大,只是好看些。还有如每个循环增减温度以及增减时间的功能,好像多数仪器都有,如有这方面的需要则要注意一下。有些软件有循环嵌套功能,在一些特殊实验中也是用得上的。
 
8.使用寿命
仪器的使用寿命,如果不考虑维修的成本,则主要与半导体制冷片的寿命相关(由于其他变温技术如压缩机以及空气加热在普通PCR仪上已经不多见了,因此在此不再多述),因为其他部件都可以维修,但半导体制冷片厂家是不维修的,也不允许更换。
 
PCR仪中这一关键部件的性能等厂家一般是不提供的。大家只能通过对半导体制冷片技术的了解以及对仪器使用时间及次数来了解了。变温对于半导体制冷片是一个考验,如果只是保温,对半导体制冷片的影响是较小的,但对电源部分的影响较大。
9.电源可靠性
这是一个很重要的因素,但也是用户有所忽视一个因素。因为绝大多数的仪器出现故障都是由于电源问题或是电源问题造成的。由于PCR仪是一个变温仪器,也是一个使用时间长并且经常连续使用的仪器,有些用户一天使用达20小时左右。
 
电源出问题的原因是多方面的,一是潮气和灰尘,在国内,北方的灰尘很大,南方的潮气很重。有时灰尘大到有些PCR仪打开后看不到电子元件了,电路板散热不好,造成电源部分烧坏。有时潮气大到仪器内可以流出水来,造成电路板短路,电源部分烧坏。
 
另一个重要原因是电网中有较多的高压脉冲群或电压过高,进口的设备较少考虑这些问题,因此这些设备在国内的故障率比在国外高很多。有些美国生产的仪器设计时考虑110V多些,虽然在220V的条件下也能正常运行,但长时间在240V左右运行则很容易出问题。
 
现在PCR仪所用的电源大多为开关电源,但也有用环形变压器的,后者重量较大,对电网也有影响。开关电源最新的技术是整体开关电源,即整个电源封在一个笔记本电脑硬盘大小的盒子内,可以防止潮气和灰尘,通过一个大的散热器和散热风扇来散热,内置过温、过压等保护功能,因此故障率很低,比较适合中国的国情。
 
10 维修成本与保修时间
这是一个很实际的问题,大多数PCR仪都只保修一年,有些在用户的要求下会增加保修时间。一般仪器的保修费用为仪器价格的8-12%每年,所以保修也就是钱。一般来讲进口仪器的维修成本会比较高,一是配件成本本身就高,二是运输费用及进口关税等。
 
另外进口仪器厂家一般都不允许进行原件级的维修,是出于利润以及质量两方面的考虑,其实国外元件级维修的成本也许比更换电路板成本还高。因此只有国内人员才进行元件级的维修,国内人力成本低,水平也高些。
 
11 温度的准确性与精确性
准确性与精确性都是有标准定义的,就PCR仪来讲,准确性指的是设定温度与实际温度差别的大小,而精确性则是指不同孔间温度的差别。一般来讲,加热模块的中心温度的准确性和精确性都要好些。
 
有些仪器厂家或代理商会将仪器的显示精度作为仪器精确度指标,如将显示精度0.1度说成精确度为0.1度。仪器显示的温度一般都是温度传感器所采集的数据在一小段时间内的平均值,有些也是经过处理的,如有些仪器在达到温度后就一动不动或达到温度前的数秒到十数秒内显示一个固定的温度,然后突然显示达到的温度等。另外,温度的准确性与精确性跟所选的温度点有很大的关系,一般仪器都选在60度左右来注明,因为这也是实验人员都关心的温度点。
 
12 升降温速率
这是很多的购买者很关心的问题,它可能会影响PCR反应时间。但在这个问题上有些理解上的差别。一般仪器所标注都是MAX大升降温速率,而用户所理解的是温度差与升降温所用时间比值。这是有些用户发现升降温速率达不到仪器所标注的速率的原因。用户所关心的是对用户来讲有意义的。
 
过度的升降温速率对于用户来讲意义不大,因为容易引发温度过冲,并需要较长时间来调整。使用过压缩机型PCR仪的人可能会有这方面的经验。这也是为什么大家会发现升降温速率很高的PCR仪其反应时间与中等速率的PCR仪差别很小的一个原因。
13 其他因素
如噪音大小、外观等也是需要考虑的。噪音就不必讲了,当然是越小越好。外观上各有所好,也不好评说,但在国内还需要考虑的有是否显脏。
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