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细胞支原体污染的原因有哪些

 更新时间:2023-02-28 点击量:590

细胞支原体污染的原因

对于生物实验器材细胞培养来说,如何预防细胞的支原体污染是每一个细胞培养者的都会考虑的问题,据统计,在细胞污染原因分析中有超过 60% 的细胞培养物污染都是由支原体所引起的。那么细胞支原体污染的原因有哪些呢?
支原体污染
细胞支原体污染的原因主要包括:
1. 不良操作:如操作者未穿实验服、未戴口罩、未熏蒸操作台等,容易引起污染。
 支原体一般通过难以追踪的各种来源进入细胞培养物。其中包括实验室人员、血清、细胞培养基、水浴锅、振荡培养箱、生物反应器、细胞培养瓶等。人为污染是上述污染源中最大的污染源。污染物可以通过脏衣服、实验室服装、人在层流气流附近的讲话、人的头皮、打喷嚏、咳嗽等传播。此外,无论细胞培养物在哪里,人员不断流入都会增加污染的风险。
2. 设备污染:如使用不洁净的实验工具,容易引起污染。
支原体可以通过交叉污染和不良的实验室技术从这些来源传播。这些措施包括对多个细胞系重复使用移液器,而不是使用一次性移液器或重复使用手套。
3. 实验环境污染:如使用不洁净的实验室,容易引起污染。
在层流气流中工作时(说话或移液时)产生的气溶胶也是造成污染的主要原因之一。如果细胞系长时间暴露在空气中,产生的这些气溶胶将在传代过程中进入培养基或从空气中进入。气溶胶是肉眼看不见的,因此在导致污染之前无法检测到。

4. 细胞容易污染:如不洁净的培养基、不洁净的细胞源、生物实验器材等,容易引起污染。
   培养基和血清也是细胞支原体污染的主要来源,培养基主要有液体培养基和粉末培养基两种。受技术条件影响,一般支原体也会通过粉末培养基进行传播。支原体的直径一般在0.1微米左右,而我们平时使用的除菌过滤一般孔径为0.22微米,这种孔径的过滤器只能起到过滤细菌的作用,多数支原体是不能过滤被过滤的。此外,组织培养基多数都含有指示剂,这些指示剂会因微生物污染导致 pH 值降低而变黄。所以通过观察培养基颜色的或PH值的变化也可以判断是否有支原体污染。
     血清也是支原体污染的主要来源。通过肉眼观察,在血清中较难发现支原体污染。但是对于科研实验室来说,由于细胞培养规模较小,一瓶胎牛血清往往可以培养多代细胞,需要反复冻融很多次,这样专业增加了支原体污染风险。还有,血清一般是在高压灭菌后才添加到培养基中的,因此无法保证血清无污染。
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