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病毒实验原理和慢病毒包装系统介绍

 更新时间:2023-04-13 点击量:844

  慢病毒是一种有包膜的RNA病毒,直径为80-120nm,呈二十面体对称结构、球形。病毒颗粒最外层是包膜(包膜蛋白决定了感染细胞的类型),再往里依次为基质蛋白和衣壳,最里面是两条相同的正股RNA链和酶(逆转录酶、整合酶和蛋白酶)。
 
慢病毒实验原理
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,基因组为双链RNA。但区别于一般的逆转录病毒,慢病毒具有更广的宿主范围,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
重组慢病毒载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础发展起来的工具载体,其毒性基因已经被剔除并被外源目的基因所取代,属于假型病毒。(一次性感染能力而无复制产生新病毒能力)
 
将靶基因随机整合到宿主的基因组中,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。被广泛应用于各种细胞系基因敲除、基因过表达、RNA干扰。
 
 
包装系统
慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的辅助蛋白。
1. 外壳糖蛋白 识别并感染宿主细胞
2. 结构蛋白 病毒复制所需要的酶
慢病毒特点
1. 慢病毒有广泛的宿主范围,能够有效地感染分裂细胞、非分裂细胞,特别适合于一些难转染的细胞(如原代细胞、干细胞、不分化的细胞)和对腺病毒感染具有较强免疫反应的细胞(如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞)等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加。
 
2. 慢病毒能将外源基因有效地整合入宿主染色体上,介导目的基因稳定、长期的表达。因此,可以利用慢病毒建立稳定细胞株。
 
3. 适用范围更广,不仅能用于体外实验,还能用于活体动物模型,尤其是动物成瘤实验。


 
慢病毒包装系统采用的包装系统是2代包装系统,即三质粒系统,该系统包括1个包装质粒(psPAX2)、1 个包膜质粒(pMD2G)、1个目的基因质粒和1株包装细胞(293T cell)。
 
苏州阿尔法生物提供细胞培养试剂、细胞培养设备、细胞培养耗材、细胞株、基因编辑细胞株、所提供的CRISPR-Cas9表达病毒具有以下特点:
1、病毒产品现货提供;
2、可以满足不同细胞的稳转的需求;
3、携带抗性用于稳转构建;
4、表达稳定适合用于基因敲除;
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慢病毒实验原理和慢病毒包装系统介绍
 
慢病毒是一种有包膜的RNA病毒,直径为80-120nm,呈二十面体对称结构、球形。病毒颗粒最外层是包膜(包膜蛋白决定了感染细胞的类型),再往里依次为基质蛋白和衣壳,最里面是两条相同的正股RNA链和酶(逆转录酶、整合酶和蛋白酶)。
 
 
慢病毒实验原理
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,基因组为双链RNA。但区别于一般的逆转录病毒,慢病毒具有更广的宿主范围,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
重组慢病毒载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础发展起来的工具载体,其毒性基因已经被剔除并被外源目的基因所取代,属于假型病毒。(一次性感染能力而无复制产生新病毒能力)
 
将靶基因随机整合到宿主的基因组中,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。被广泛应用于各种细胞系基因敲除、基因过表达、RNA干扰。
 
 
包装系统
慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的辅助蛋白。
1. 外壳糖蛋白 识别并感染宿主细胞
2. 结构蛋白 病毒复制所需要的酶
慢病毒特点
1. 慢病毒有广泛的宿主范围,能够有效地感染分裂细胞、非分裂细胞,特别适合于一些难转染的细胞(如原代细胞、干细胞、不分化的细胞)和对腺病毒感染具有较强免疫反应的细胞(如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞)等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加。
 
2. 慢病毒能将外源基因有效地整合入宿主染色体上,介导目的基因稳定、长期的表达。因此,可以利用慢病毒建立稳定细胞株。
 
3. 适用范围更广,不仅能用于体外实验,还能用于活体动物模型,尤其是动物成瘤实验。


 
慢病毒包装系统采用的包装系统是2代包装系统,即三质粒系统,该系统包括1个包装质粒(psPAX2)、1 个包膜质粒(pMD2G)、1个目的基因质粒和1株包装细胞(293T cell)。
 
  苏州阿尔法生物提供细胞培养试剂、细胞培养设备、细胞培养耗材、细胞株、基因编辑细胞株、所提供的CRISPR-Cas9表达病毒具有以下特点:
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2、可以满足不同细胞的稳转的需求;
3、携带抗性用于稳转构建;

4、表达稳定适合用于基因敲除;

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