(1)安装电泳管
选择聚含均匀、无气泡、无裂缝、胶面平整并与管壁没有脱离现象的合格凝胶电泳管 插入上电极槽底板的各圆孔中，留1/5在底板上方，保证使电泳管与底板垂直，密封处不 致渗漏。
(2) 加样
可利用上述方法制成样品胶，也可以用如下的一种方法加样。
将样品溶于200mg/ml浓度的蔗糖溶液中，或溶在10%甘油中，然后加在浓缩胶的 表面。
或将熔化的琼脂与样品溶液混合后加在浓缩胶表面。
或用与电泳管内径相近的圆形厚滤纸片，将样品溶液吸收后，紧贴在浓缩胶表面。 如样品是固体，应先溶在浓缩胶缓冲液中，并加入足够量lmol/L的蔗糖溶液，使样 品溶液的比重增大，再加在浓缩胶表面.
加样体积一般不超过100山常用虽为20〜50山 含量不超过100昭,常用量为20〜 5外拿如果样品是一个多组分的混合物，加样量可增加到200Mgo如果样品是一种抽提液, 必须去除有形颗粒，取可溶部分上样。
必须保证样品溶液具有低电导性，盐浓度不应超过0. 05mol/Lo
目前常用的加样方法是：用稀释5-10倍的浓缩胶缓冲液，使其成lmg/ml的浓 度，再加蔗糖使成浓度，然后在浓缩胶面上有电极缓冲液存在的情况下，用合 适的加样工具如微堇注射器，插入浓缩胶面与上方的电极缓冲液界面处，轻轻地将样品加 在浓缩胶面上.
(3) 加电极缓冲液
样品加入后，在上下两个电极槽中灌注电极缓冲液，缓冲液的温度需与电泳温度一 致。加入缓冲液时应小心操作，不能搅动电泳管中的样品溶液，并不使电泳管上下口留有 气泡。缓冲液的用垃随容器的大小而有异。一般情况下电极槽中的缓冲液量能使电泳管 至少有3/5浸入缓冲液为宜。
(4) 加指示染料
对于诚性系统常用的指示染料为0. 001%漠酚蓝，酸性系统常用的是0. 005%甲基绿 或甲烯蓝。用量为每500ml缓冲液加指示染料1mlD 一般加在上电极槽缓冲液中。
另有一种办法是将染料配制成0. 1%浓度的溶液，每管加5贝，与样品溶液混合后加 入。
(5) 电泳
装配好电极，接通直流电源。碱性系统上电极接负极，酸性系统上电极接正极。
对于直径5〜7mm的凝胶，最初2分钟用1mA/管的电流进行电泳，然后逐渐升高到 2〜5mA/管（10分钟）。通常5mm X 65mm的凝胶在20 C时用4mA/管进行电泳,大约需
时40分钟。
在电泳过程中，常要求电流保持恒定。此时，电压会有升高。如果电流大而产生过高 的欧姆热，影响某些样品时，可以降低电流而延长电泳时间。
可以看岀，由于水的电解在负极产生H2,在正极产生1/2 O2,同时,HA不断消耗。从 两个电极反应可以知道：为了保持缓冲液有几乎不变的缓冲能力，上下电极槽必须足够 大，以盛放足够量的缓冲液。
有时候，我们需要进行长时间的电泳。例如:DNA的分离有时长达10余小时。为了防 止由于电极反应使缓冲能力耗尽从而引起pH的变化影响分离，1977年美国匹兹堡大学 T.G. Cooper提出用循环缓冲液的办法来保持缓冲能力不致耗尽，以达到缓冲溶液能较 长期使用的目的。
Cooper的循环缓冲液方法示意见图2-3o
上下两个电极槽的缓冲溶液水平保持恒定，但又没有建立通路。下槽的缓冲液可靠输 液器一滴一滴地滴入上槽。而当上槽的缓冲液增加时，就会经溢流管滴回到下槽，使上下 两槽的缓冲液水平在电泳过程中始终保持恒定。要注意的是,滴入上槽中的缓冲液，必须 不是线状连续的。
凝胶的取出
电泳结束取出电泳管。然后,用配有细长针头并盛有水的注射器，将针头小心地插入 凝胶和玻璃管壁之间，边插入转动管子同时压进一些水，另一端也作同样处理。然后，将管
F套上橡皮管用自来水压力压出凝胶，或用洗耳球压岀凝胶。如果压岀凝胶困难时，注射 器内可装甘油代替水压入凝胶和管壁之间。也可以用一根金属细丝，从凝胶和管壁之间穿 过整个玻璃管，然后，拉紧金属细丝转动玻璃管一周，就能使凝胶脱离管壁，再用洗耳球挤 压，就很容易压出。
也可以将电泳管浸入甲醇中，使凝胶收缩与管壁脱离而取岀，或根据具体条件用别的 办法取出凝胶。但必须注意，无论用何种办法，必须不损伤胶面。特别是浓度低的大孔凝 胶，宙「机械强度差，取岀时应格外小心。
凝胶的染色——分离区带的检出
(1)蛋白质的一般染色方法
固定和染色常可同时进行。因为，染料的溶剂一般就是固定剂.常用的几种染色方法 简述如下：
(i) 氯基黑10B (amido black 10B)用7%的醋酸配制0. 5%〜1%的染料溶液，浸 染2〜6小时，染色后用水洗。
用7%的醋酸配制1%的染料溶液,96 C保温染色10分钟，可以改善对弱区带的分辨 率。
(ii) 考马斯亮蓝 R-250 (Coomassie brilliant blue R-250)先用 12. 5%三氯醋酸固 定数小时，出现白色沉淀条纹后，在三氯醋酸中滴加少量1 %考马斯亮蓝R-250溶液，过 夜，用此法染色底色很浅，通常染色后不需脱色。
或用0. 25%考马斯亮蓝R-25O的甲醇-醋酸混合液(454ml 50%的甲醇+ 46ml冰醋 酸)染色2-10小时。
或先用20%磺基水杨酸固定18小时，然后用0. 25%考马斯亮蓝R-25O的无重金属 离子的水溶液染色0. 5〜2小时。或用0. 25%考马斯亮蓝R-250的9%醋酸和45%甲醇 混合液染色0. 5-2小时。
(iii) 考马斯亮蓝G-250先在5%三氯醋酸中固定30分钟，水洗几次，然后用1% 该染料的7%醋酸溶液，染色10分钟。或用0.1%该染料的甲醇:水：醋酸(10 ： 10 ： 1 v/v)混合液，染色30分钟。
(iv) 固绿(fast green)用1%固绿的7%醋酸溶液，染色2小时。最好在10C以下进 行0
(v) 普施安亮蓝RS (Procion brillant blue RS)先在20%磺基水扬酸固定0. 5〜2 小时，然后用1%该染料的10%醋酸和50%甲醇混合液染色1〜2小时。
(vi) 1%考马斯亮蓝R-250溶剂是水：甲醇：冰醋酸(5 : 5 ： 2),使用前用滤纸 过滤去除不溶物。柱状凝胶条室温染色至少4小时。1.5mm厚的平板凝胶，室温染色4〜 6小时。
(vii) 硫酸铜-考马斯亮蓝混合染色液10g硫酸铜定溶于800ml蒸偕水中，再加入 200ml醋酸作为染色贮备液A。
3g考马斯亮蓝G-25O溶于900ml甲醇中，再加蒸馋水至1 000ml作为染色贮备液B。 使用前等体积搅拌混合贮备液A和染色30分钟至数小时视不同样品而异。
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