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荧光定量PCR仪是一种能够定量测量DNA模板数量的实验设备

 更新时间:2023-06-24 点击量:249
  一、概述
  荧光定量PCR仪是一种能够定量测量DNA模板数量的实验设备,它通过利用特殊的荧光探针技术来检测PCR反应体系中目标序列的扩增情况。本文将着重介绍其技术原理、工作流程及应用领域等方面。
  二、技术原理
  荧光定量PCR(qPCR)是在传统PCR扩增基础上加入了荧光信号检测模块而发展出来的新型分子生物学方法。qPCR的开发使得我们可以更快地监测和诊断感染性疾病,同时也可应用于其他多样化领域中。
  其基本原理为:在PCR反应体系中添加一个双链DNA片段所对应序列位置上引物,该引物含有两个相互抵消的非共价结合螺旋桥段,并连接一个局部菲罗显色组分;当绑定到拷贝数目足够多时,则会放射出强烈稳定可见波长范围内的带谱突峰信号,并最大限度降低背景杂讯产生率,从而提高数据准确性和灵敏度。通常,荧光定量PCR可以分为TaqMan法、SYBRGreen法等多种技术实现方式。
  三、工作流程
  1.样品制备:将待测的DNA分子从样本中提取出来,并加入适当的反应体系缓冲液中进行纯化和检测处理。
  2.PCR反应配置:根据实验需求,在荧光定量PCR仪上设置好所需扩增的DNA序列及引物、孵育温度、放大周期等参数。然后,按照设定步骤依次向每个试管内加入合适数量的DNA模板及其他反应成分,保证其在特定条件下能够完成目标扩增过程。
  3.执行PCR循环程序:通过精确控制荧光信号计数器在不同时间点或温度下发射出来信号波动幅度大小值,在整个PCR循环过程中持续监测并记录下被放大产生物质(如靶基因)相对于背景杂讯之间的比例关系。同时,结合前期已有数据统计信息和概率模型推演算法,可以快速准确地估算出样品原始含量并输出相应结果报告。
  四、应用领域
  由于qPCR技术具有高灵敏性、高特异性、快速等优点,因此已广泛应用于医学临床检测、病毒检测、食品安全监测等领域。同时,在生物科学研究中也可以利用qPCR技术来分析基因表达水平、评估DNA修复能力和药物代谢度等问题,有助于推动相关学科的进一步发展。