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NK细胞的培养要点

 更新时间:2023-07-03 点击量:1078

NK细胞(如NK-92细胞)是重要的免疫细胞,并且在体外的培养中需要特别注意以下事项:

 1. 培养基准备:使用无菌和新鲜配制的培养基,如RPMI-1640。培养基中应添加适量的IL-2,以维持细胞的生长和活力。IL-2的保存温度一般为-20℃,解冻后放置在4℃冰箱保存。使用前预热,使用完毕后立即放回4℃冰箱保存,不超过两周。 

2. 细胞密度和补液:细胞应保持在适宜的密度范围内,不宜过于密集或过稀。细胞补液周期一般为2-3天。可以交替使用半量换液和离心换液法。半量换液2-3次后,离心全部换液一次。在补液过程中,也要及时补充适量的IL-2。 

3. 观察和处理细胞聚集物:NK-92细胞在培养过程中常常形成细胞团块,这是正常现象。细胞团块可以适当吹散,但不必刻意将其分散成单颗细胞。过度吹散会导致细胞损伤和细胞死亡。对于过于庞大的细胞团块,可进行分散处理,以确保细胞的均匀生长。

 4. 细胞传代:细胞传代是保持细胞活力和增殖的重要步骤。传代时,应使用适当的酶消化液,如trypsin,轻轻松弛细胞团块,并进行细胞计数和分配。传代后的细胞应补充适量的新鲜培养基和IL-2。 

5. 细胞冻存:对于长期保存和备份细胞,冻存是必要的。在冻存前,细胞应处于健康和活跃的状态。推荐使用合适的冻存液(如90% FBS和10% DMSO的混合液),将细胞分装至冻存管中,并按照标准的冻存程序进行冷冻保存。注意控制冻存速度和温度。 

6. 细胞复苏:细胞从冻存状态复苏时,应谨慎操作。将冻存管放入37℃水浴中,迅速退冰,并将细胞悬液转移到新鲜的培养基中。注意在复苏过程中避免过度吸吮和吹打,以减少细胞损伤。 

  NK细胞的培养需要严格注意培养基的配制和细胞处理的细节,以确保细胞的健康生长和活性。在培养中遵循标准的操作流程,并进行定期的细胞观察和细胞传代,有助于获得高质量和可重复的实验结果。

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