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贴壁细胞培养常见的贴壁问题及解决方法

 更新时间:2023-07-13 点击量:852

贴壁细胞培养是一项常见的细胞培养技术,但在实际操作过程中,常常会遇到一些问题。下面将介绍贴壁细胞培养中常见的五大问题,并提供相应的解决方法。

1. 传代后部分细胞漂浮

原因及解决方法如下:

传代前细胞密度太大:细胞融合度达到80%时可以进行传代操作,传代密度需要适中,密度过高会导致传代后细胞漂浮。

细胞状态不好:可以通过提高血清比例、保持稳定的培养环境等方法改善细胞状态。

吹打次数过多造成机械损伤:在吹打过程中要轻柔操作,当细胞呈单颗粒时可停止吹打,避免产生气泡。

培养基更换后不适应:可以将培养基换回原来使用的培养基,或者与原培养基比例混合后使用,让细胞有一个适应期。

培养液配制和储存不当,如pH值过碱、谷氨酰胺含量不足等原因:注意正确配制培养液并储存好,确保培养液的质量。

2. 传代后细胞变形

原因及解决方法如下:

变形但细胞仍在生长:可能是血清批次不一样导致的,建议使用同一批次的血清,若更换血清则需要与原血清混合并逐渐过渡。

变形且细胞不长且碎片增多:可能是传代操作过程中的损伤,如消化不当或细胞受到污染。应根据细胞状态调整消化时间,严格进行无菌操作,确保细胞无外源性污染。

3. 细胞生长周期变慢,边养边漂

原因及解决方法如下:

细胞传代时密度太稀或太密:建议在细胞融合度达到80%左右进行传代,传代密度适度,密度过低会延长生长周期,密度过高会造成细胞接触抑制。

传代操作不当:根据细胞特性调整消化时间,观察细胞回缩变圆并有少量细胞脱落后终止消化,频繁换液和清洗细胞也会影响细胞状态,常规换液时间间隔为2-3天。


细胞培养


4. 传代后细胞成团

解决方法如下:

低密度接种,延长换液时间,避免细胞脱落。

使用多聚赖氨酸包被培养器皿,增加细胞贴壁的牢固度,减少细胞聚集成团的几率。

重新铺板,并更换新配制的培养基,增加血清的比例但不超过5%

接种时减少培养基量,以加快细胞贴壁的速度,等待细胞贴壁后再补加培养基到正常用量。

5. 贴壁细胞培养细胞出现空泡

原因及解决方法如下:

正常的细胞活动:有些细胞会出现正常的自噬行为或其他膜泡活动,无需特殊处理。

细胞营养不良:可能是由血清不适应、培养基成分改变或换液不及时等原因导致的,可以通过更换适合的血清或及时换液来解决。

细胞受损:注意培养条件和操作手法,避免机械损伤或pH值过高或过低等情况。

通过了解这些常见的贴壁问题及解决方法,可以帮助科研人员在贴壁细胞培养中更好地处理各种技术难题,从而获得高质量的细胞培养结果。

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