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质粒基因组提取实验步骤

 更新时间:2023-08-11 点击量:505

DNA提取是生物学实验中常见的实验步骤,用于分离和纯化DNA以进行后续实验分析。本文将介绍使用天根质粒 DNA 提取试剂盒进行质粒基因提取的实验步骤。该试剂盒使用碱裂解法提取质粒DNA ,具有简便快速、高效纯化的特点。


pUC18质粒图谱

    实验步骤如下:

一、培养细菌并制备含有质粒的细胞悬液:

1. 从平板上挑取单克隆细菌,转入含有3mL LB+Amp100培养基的试管中。使用含有抗生素氨苄青霉素的LB 培养基可以选择性地培养含有质粒的细菌群体。

2. 37℃的恒温摇床上振荡培养过夜,以促进细菌生长并扩增质粒。

二、收集和裂解细胞,分离并纯化质粒DNA

3. 将培养液倒入1.5 mL微量离心管中,以4000 r/min离心 2 min,使细菌沉淀。

4. 倒出培养液,使细胞沉淀尽可能干燥。

5. 加入100 μL溶液Ⅰ( 50 mmol/L葡萄糖,25mmol/LTris (pH 8.0)10 mmol/L EDTA  pH 8.0)),充分振荡混匀,室温放置5 min

6. 加入200 μL溶液Ⅱ( 0.2 mol/L NaOH1% SDS),盖紧管口,颠倒混匀内容物,将离心管放置冰上5 min 

7. 加入150 μL溶液Ⅲ( 5 mol/L乙酸钾),盖紧管口,颠倒数次使混匀。冰上放置5 min

8. 12000 r/min离心15 min,将上清转至另一离心管中。

9. 可选择性地加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)进行去蛋白处理,使 DNA与蛋白质分离。反复混匀后,以10000 r/min离心10 min,将上清转移到另一离心管中。该步骤可以根据实验需求选择性地进行。

10. 向上清中加入2倍体积的乙醇(约700μ L),混匀后,室温放置15-30min。以10000 r/min离心 10 min 。倒去上清液,将离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。

11. 500 μL 70% 乙醇轻轻洗涤质粒 DNA沉淀,以10000 r/min离心5min,弃去上清液,并使沉淀干燥。

12. 加入适量(20-50 μL)的无菌水,室温使 DNA全溶解,然后将溶解的DNA-20℃保存。

    实验中,天根质粒DNA提取试剂盒提供了各种试剂和缓冲液,方便实验操作和质粒 DNA的提取。这些试剂的配方经过优化和验证,确保提取的质粒 DNA质量好、纯度高。


天根DP105


    注意事项:

    1. 溶液Ⅱ需要新鲜配制,以确保高效的细胞裂解和DNA解链。

    2. 加入溶液Ⅱ后不要剧烈震荡,以免影响DNA质量。

    3. 沉淀DNA通常使用冰冷的乙醇,加入后放置时间稍长可使DNA 沉淀全,并可用异丙醇代替乙醇,但需注意异丙醇会将盐沉淀下来。

    4. DNA溶解过程中,温度要严格控制,避免过高的温度导致DNA 降解。

天根质粒DNA提取试剂盒提供了方便、快速、高纯度的质粒DNA提取方法。根据实验步骤操作,可以有效提取并纯化质粒 DNA。该方法适用于大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA,满足后续实验的需求。

苏州阿尔法生物提供的实验试剂主要有:

1.细胞类产品:

各种的肿瘤细胞、基因编辑细胞:比如常见的HEK293细胞、CHO细胞、骨髓干细胞、胚胎2. 天根试剂盒产品:天根系列试剂盒主要有质粒大提、质粒小提等各种质粒抽提试剂盒、血液DNA提取试剂盒、细菌DNA提取试剂盒、病毒 RNA 提取试剂盒、天根质粒DNA提取试剂盒、 植物组织DNA提取试剂盒等各种基因组提取试剂盒。还有 DH5&/TOP--10感受态等。

3.  其他试剂类:细胞培养试剂、分子生物学试剂、缓冲液、培养基、抗体、碧云天试剂等。