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SH-SY5Y细胞转染步骤

 更新时间:2023-09-05 点击量:464

 SH-SY5Y细胞是神经母细胞瘤细胞系中常用的模型系统,广泛用于神经生物学和神经药理学研究。转染SH-SY5Y 细胞是一项重要的实验技术,在基因功能研究、蛋白表达和定量分析等方面扮演着关键角色。然而,由于SH-SY5Y细胞的特殊性质,使用传统转染方法可能会遇到一些困难。因此,本文将介绍一种优化的SH-SY5Y 细胞转染方法,并详细描述每个步骤。

 材料与试剂:
- SH-SY5Y细胞系:可从Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或其他来源获得。
- 细胞培养基:Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)/F12混合培养基。
- 热稳定型胰酶:用于细胞的传代与分离。
- 转染试剂:例如,聚乙烯亚胺(PEI)、脂质体等。
- 目标基因的质粒DNA或siRNA:用于转染和表达。
- Opti-MEM:用于稀释转染试剂和质粒。
 

SH-SY5Y细胞.jpg


优化方法:
一、准备SH-SY5Y细胞
1. 获得SH-SY5Y细胞系并进行培养。
2. 在T25细胞培养瓶中分别加入10 ml完整的DMEM/F12培养基及10%胎牛血清(FBS)。
3. 将SH-SY5Y细胞从细胞冻存管中复苏,并将细胞传递至培养瓶中。

4. 在37℃、5% CO2的培养箱中培养细胞,直至细胞达到80-90%的密度。


二、转染前的预处理
1. 转染前用DMEM/F12培养基含10% FBS对SH-SY5Y细胞进行预处理。
2. 将细胞培养至80-90%的密度。

3. 用1X PBS洗涤细胞2次,去除细胞内的残留培养基。


三、转染操作
1. 根据转染试剂的使用说明,将转染试剂稀释至合适的浓度,如使用PEI转染,可在Opti-MEM中稀释PEI至最终浓度。
2. 在另一个离心管中将质粒DNA或siRNA按照使用的量稀释至合适体积,并在Opti-MEM中混合均匀。
四、转染操作步骤
1. 向细胞中加入预先稀释好的转染试剂,注意不要形成气泡并避免细胞过度干扰。
2. 轻轻震荡培养瓶,使转染试剂均匀分布。
3. 将稀释好的质粒DNA或siRNA加入到培养基中,与转染试剂充分混合,避免形成沉淀。
4. 震荡培养瓶并置于37℃的培养箱中进行培养。
5. 根据研究需求,在48-72小时后进行下一步实验(如蛋白表达、基因敲除等)。
    本文详细介绍了一种优化的SH-SY5Y细胞转染方法。通过合适的细胞预处理步骤,并使用适当的转染试剂和质粒DNA/siRNA浓度,可以实现高效且可重复的SH-SY5Y细胞转染。值得指出的是,转染条件可能因具体实验目的而略有不同,因此每位研究者都应根据实验需求进行适当的优化。这种优化后的转染方法将有助于更好地理解SH-SY5Y细胞中的基因功能并推动神经科学研究的发展。

  

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