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人脐静脉内皮细胞HUVEC培养技术

 更新时间:2023-09-27 点击量:494

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的培养是一项重要的细胞培养技术。下面将详细介绍HUVEC的培养步骤,并分享一些经验。

1. 准备工作:

   a. 15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。

   b. 注意脐带最多贮存24小时在4℃下,室温下不超过6小时。

2. 洗涤脐带:

   a. 使用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中,用无菌的PBS溶液冲洗3-5次,直至污血冲洗干净。

3. 消化脐带:

   a. 用手术钳夹紧脐带下端,加入15ml的胶原酶(1mg/ml)室温下消化15-20分钟,并不时上下摇动脐带。

4. 收集消化液:

   a. 消化完后,将下端手术钳松开,消化液流入一个50ml无菌离心管中,用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。

5. 离心:

   a. 将收集液离心(2000/分)3分钟。

6. 转移到培养瓶中:

   a. 倒去上清,加入10ml M199培养基(加入10U/mlbFGF),用弯管吹散细胞,将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中,37℃培养。

   b. 在每个培养瓶中加入3-4ml无菌的1%明胶溶液,摇匀使得明胶溶液铺满瓶底,放入37℃孵育,最少2小时,用前将明胶溶液倒掉即可。明胶包被有利于细胞贴壁。

7. 培养细胞:

   a. 培养24小时后,倒掉培养基,并用无菌的PBS溶液清洗2-3次,洗掉红细胞和死细胞,加入10ml新鲜的M199培养基。

8. 换培养基:

   a. 以后每2天换一次培养基(每次换掉2/3的培养基)。

9. 细胞生长:

   a. 一般培养5-7天,细胞可长满至80-90%单层,这时可以进行传代。

10. 传代:

    a. 倒掉培养基,用无菌的PBS溶液清洗2-3次,加入2-3ml消化液(0.25%胰酶+0.1%EDTA)消化细胞,在显微镜下观察,一旦细胞变圆,即加入2-3倍有血清的DMEM培养基终止反应。

    b. 用弯管将细胞吹打下来,并将所消化的细胞转移到一个50ml无菌离心管中,2000/分,离心3分钟。

    c. 倒掉上清,加入10ml新鲜培基,一般一瓶细胞可传代3-4瓶。以后照此传代培养。

11. 优化培养:

    a. 一般传代2-3代(培养了20天左右)用于各种实验效果较好。

以上是人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的培养步骤,希望对你有所帮助。