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PANC-1细胞传代实验步骤

 更新时间:2023-10-24 点击量:348


PANC-1细胞是胰腺癌细胞的一种常用细胞系,用于研究胰腺癌、药物筛选以及其他相关研究。为了保持细胞的生长和状态稳定,定期进行细胞传代培养是必要的。本文将为您介绍PANC-1细胞传代培养的实验步骤,以帮助您高效地进行实验。

一、准备工作:

1.1 预先准备所需的培养基和相应的补充物,如DMEM/F12培养基、胎牛血清、抗生素等。

1.2 准备需要的培养器具和试剂,如细胞培养箱、离心机、洗涤液、组织培养皿等。

二、分离细胞:

2.1 在无菌条件下,将PANC-1细胞从培养皿中取出,用PBS缓冲液轻轻洗涤一次,去除残留的培养基。

2.2 加入适量的胰酶/EDTA消化液,并在37°C的培养箱中进行消化,通常需要5-10分钟。

2.3 观察细胞是否脱离培养皿,可以用显微镜观察。如果细胞脱离,可以进入下一步骤。

三、培养细胞:

3.1 向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液,并 gently pipetting混合。

3.2 离心管离心,在1500 rpm速度下离心3-5分钟,以沉淀细胞。

3.3 弃去上清液,保留沉淀的细胞。

3.4 加入适量的新鲜培养基,将细胞重新悬浮。

3.5 计算细胞数目,可使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。

3.6 调整细胞密度至所需的浓度,一般为每毫升10^5-10^6个细胞。

3.7 将细胞悬液转移到新的组织培养皿中,确保培养皿表面涂有适当的涂层剂,如凝血酶或聚-半乳糖醛酸。

四、培养条件和观察:

4.1 将细胞放回到37°C的培养箱中,并提供适当的培养条件,如适宜的温度、湿度和CO2浓度。

4.2 定期观察细胞的生长情况,通常一天观察一次。使用显微镜检查细胞的形态、健康程度和污染情况。

4.3 根据细胞密度和生长情况,定期更换培养基,通常为每两到三天。

4.4 留意细胞培养过程中的任何变化或问题,并及时采取相应的措施,如进行细胞冻存、除污染等。

五、细胞传代:

5.1 当细胞达到80%90%的密度时,即呈现接近饱和的状态,应进行细胞传代以避免细胞过度生长。

5.2 重复步骤2中的分离细胞的操作,将细胞从当前培养皿中分离出来,重新进行培养。

5.3 将分离的细胞按照步骤3重新培养,并继续进行实验或研究。

细胞传代培养步骤.jpg


结论:

本文介绍了PANC-1细胞的传代培养实验步骤,包括准备工作、分离细胞、培养细胞、培养条件和观察以及细胞传代等。正确和规范的实验操作可以帮助您获取到高质量的细胞,并为后续实验提供可靠的基础。

以上就是PANC-1细胞的传代培养实验步骤,希望能对您的研究工作有所帮助!

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