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使用CD4磁珠进行细胞磁珠分选的方法

 更新时间:2024-03-05 点击量:186

CD4 磁珠是一种用于对细胞进行磁性标记的工具,可以有效地分离和纯化CD4+细胞。该方法具有高磁珠结合力,操作简便快捷,能够获得高纯度、高得率和高活率的CD4+细胞。 使用CD4磁珠进行磁珠分选的方法如下:

一、样本准备

1. 处理抗凝的外周血液: 使用密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)。将外周血液样本缓慢均匀地加入离心管中,叠加上相同体积的离心液。以1000g的速度离心20分钟。将上清液去除,并轻轻将PBMC层转移至新的离心管中。添加适量的缓冲液使得体积增加至所需的体积。

2. 处理组织: 使用标准的方法制备组织的单细胞悬浮液。先将组织切碎并转移到含有蛋白酶等消化酶的缓冲液中。根据实验需求,选择合适的消化时间和温度。消化完毕后,将组织块过滤去除,并用缓冲液洗涤细胞沉淀。

CD4分选磁珠.png

二、磁珠标记

1. 细胞计数: 使用细胞计数仪准确计算细胞数量。

2. 离心: 将细胞离心300g,离心时间为10分钟,以去除上清液。

3. 重悬: 对于每1亿细胞,使用80μL缓冲液将细胞重悬。

4. 磁珠添加: 对于每1亿细胞,使用20μL的CD4磁珠将其加入细胞悬液中。轻轻混合使磁珠均匀分散。

5. 孵育: 将细胞悬液和磁珠混合物在2-8℃的环境中冰上或冰箱中孵育15分钟。如果在冰上孵育,需要延长孵育时间。这一步骤是为了让CD4磁珠与目标细胞结合。

6. (可选)染色抗体: 如果需要,可以加入荧光偶联的CD4抗体。在2-8℃的环境中避光孵育5分钟。

7. 洗涤: 对于每1亿细胞,加入1-2mL缓冲液,并使用300g的速度离心10分钟。去除上清液。

8. 细胞重悬: 使用500μL缓冲液将细胞沉淀重悬,并轻轻混合,使细胞均匀悬浮。

CD4分选磁珠.jpg

三、磁性分选

1. 放置分选柱: 将分选柱放置在分选器的磁场中。

2. 分选柱湿润: 将适量的缓冲液加入分选柱中,充分湿润整个分选柱的内部表面。对于xM规格的分选柱,加入500μL缓冲液;对于xL规格的分选柱,加入3mL缓冲液。

3. 加入细胞悬液: 将细胞悬液缓慢地加入分选柱中,确保细胞均匀分布在整个分选柱中。

4. 分选: CD4+细胞与磁珠结合,被吸附在分选柱上,未标记的细胞会顺着缓冲液流下来。加入适量的缓冲液,直至所有液体通过分选柱。三次洗涤,每次加入适量的缓冲液,等待液体全部流尽。

5. 收集未标记细胞: 洗涤后的流出物中包含未标记的细胞。收集这部分细胞作为未标记细胞。(对于xM规格分选柱,收集3次500μL的流出物;对于xL规格分选柱,收集3次3mL的流出物)

6. 收集目的细胞: 将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。加入适量的缓冲液到分选柱中,迅速用塞子推下,收集洗脱出的磁性标记的CD4+细胞。对于xM规格分选柱,加入1mL缓冲液;对于xL规格分选柱,加入5mL缓冲液。

7. (可选)进一步富集: 为了提高标记细胞的纯度,可以将洗脱的部分再次进行磁性分选。使用新的分选柱,重复步骤1至6中描述的磁性分选过程。

以上就是使用CD4磁珠进行细胞磁性分选的详细操作步骤。请注意在操作过程中保持环境的清洁和无菌,并避免磁珠暴露在强磁场之外。

Changbai细胞分选平台3.png


 注意事项:

1. 磁珠应在2-8℃的条件下避光保存,不得冷冻。

2.  除了CD4磁珠,我们公司还提供SophMag®手动磁分选套装,可以进一步提高磁分选效果。搭配使用,可以获得较好的分选结果。

CD4磁珠是一种方便快捷、高效纯化CD4+细胞的工具,适用于细胞分选和纯化等实验。无论是在科研还是临床应用中,都具有广泛的应用。需要了解更多细胞分选仪、细胞分选磁珠等相关产品请进入苏州阿尔法生物实验器材进行了解和咨询。