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影响琼脂糖凝胶电泳制胶的几个因素

 更新时间:2024-04-30 点击量:102

对于一般的分析工作,特别是定量分析工作来讲,人们强调制备的凝胶要有较好的可重复性。如果制备得到的凝胶本身没有重复性,比如孔径前后两次凝胶相差颇大,那么在 这样的条件下,所得到的分析结果,其可信性就有问题,往往会使几次结果不能重复。所以,为了要获得可靠的分析结果,在制胶时对能影响凝胶聚合的种种因素必须加以控制。

有哪些主要因素,又怎样来控制它们的条件,分别简述如下:

(1) 制备凝胶用的主要试剂

(a)丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺至少是分析纯级的试剂。存放时间一般不超过1年, 如果存放时间过长,丙烯酰胺受潮水解,丙烯酸含量增多。若利用它为单体,聚合时孔径很 不均一,表现现象是聚合时间延长,甚至很难聚合,这就必须重结晶。对于定量分析工作一 般都要求对单体进行重结晶。

丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺应放在棕色瓶中,干燥,低温( + 4C)条件下保存。丙烯酰 胺经阳光照射,自身会聚合成长链,酰胺基也会缩合形成亚胺桥,从而影响交联结果。

配制成的贮存液,也应盛于棕色瓶中,于+ 4 C保存,时间不超过1个月。

预制胶使用

(b)TEMED应密封置于冰箱中贮存,使用的量应使凝胶能在30〜60分钟内聚合完 成,如前述不再重复。

(c)过硫酸铵应在临用前配制。配制好的溶液应在冰箱中存放,使用期不超过1星 期。存放1星期后的过硫酸铵,可能仍会起作用,但不适用来作精细的分析工作。

(2)温度

必须保持聚合温度的恒定。聚合速度与温度有关,一般是温度高聚合快,而聚合的快 慢影响交联孔径的大小,所以,必须保持恒定温度。通常都固定在与电泳相同的温度。凝 胶的聚合反应是一个放热反应,所以必须有效地散热。一般用薄壁玻璃管在流通空气中进 行凝胶聚合,便能达到散热的目的°

(3)氧气

氧是凝胶链合成反应的终止剂。所以,制胶前必须充分抽气,使02降低到一定水平 以下或者充以惰性气体,如氧气来降低02的含量。

(4)光照

光照的时间和强度都和凝胶的聚合速度有关。因此,必须固定光源强度、光照距离和 光照时间。

注意和控制好以上几点,制备得到的凝胶其可重复性的程度就高。