概述:
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位。
目的:
测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。
步骤:
1、细胞准备;
2、固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞,固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月;
3、通透。使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞,一般需要在加入抗体孵育前,对细胞进行通透处理,以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。
4、封闭。使用封闭液对细胞进行封闭。
5、一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。
6、二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。
7、封片,荧光显微镜检查
免疫荧光技术用到的实验室仪器和设备:
免疫荧光技术是一种结合了免疫化学和荧光标记技术的方法,用于在细胞或组织样本中检测特定的抗原或抗体。进行免疫荧光实验通常需要以下实验室仪器和设备:
荧光显微镜:用于观察和拍摄荧光标记的样本。
载玻片和盖玻片:用于制作样本切片。
显微镜玻片加热器:用于固定样本。
孵育箱:用于在特定温度下孵育样本和试剂。
离心机:用于离心样本,如分离细胞或去除多余抗体。
移液器:用于准确量取和转移液体。
吸头:与移液器配合使用,用于吸取和分配液体。
洗板机:用于自动化洗涤步骤,减少交叉污染。
湿盒:用于在暗环境中孵育样本。
显微镜载物台加热器:用于维持样本温度,尤其是在观察活细胞时。
激光扫描共聚焦显微镜(可选):用于更高级的荧光成像。
pH计:用于调整和监测溶液的pH值。
去离子水系统:用于制备高纯度的去离子水。
滤光片:用于选择特定波长的光。
荧光染料:用于标记抗体或抗原。
抗体和抗原储存设备:如冰箱和-80°C超低温冰箱。
生物安全柜:用于在无菌条件下操作样本。
热封膜机:用于封膜显微镜玻片。
洗涤瓶和容器:用于存储和洗涤试剂及样本。
显微镜摄像头:用于捕捉显微镜下的图像。
图像分析软件:用于分析显微镜拍摄的图像。