HE90/HE120/HE220 + EPS1500 + VE586PRO操作使用全覆盖

本文不是设备参数介绍，是可直接上岗操作的参考。

 包含：凝胶尺寸、梳子选型、上样量、不同片段对应胶浓度、恒压 / 恒流底层原理、分段跑胶程序、制胶禁忌、缓冲液寿命、条带拖尾 / 弥散 / 歪带 / 无带全套故障排查、核酸 + 蛋白双实验完整标准参数。

一、设备分工（实验必须牢记）

1. HE 系列 = 只跑琼脂糖核酸（DNA/RNA）
不可以跑蛋白、不可以跑 PAGE 胶。

2. VE586PRO = 只做蛋白湿转（WB 转膜）
不可以跑核酸。

3. EPS1500 = 万能电源
核酸→恒压
转膜→恒流

二、三套电泳槽【胶尺寸 + 梳子 + 上样量 + 适用实验】总表

1. HE-90 / HE90B（小型快速鉴定槽）

凝胶尺寸

• 6×6 cm 迷你胶

• 6×12 cm 标准小胶
特点：胶薄、体积小、缓冲液少、跑速最快

梳子 & 上样量（实验标准）

• 0.75mm 36 齿密梳：6–8 μl（纯 PCR 鉴定）

• 1.0mm 20 齿标准梳：12–15 μl（常规样本）

• 1.5mm 12 齿宽梳：20–25 μl（低浓度补量、Marker）

适用实验（严格限制）

• 普通 PCR 阳性 / 阴性鉴定

• 质粒有无鉴定

• 不适合：大片段分离、不适合切胶回收、不适合高精度分型

2. HE-120 / HE120B（实验室全能主力槽）【重点】

四种凝胶尺寸（全覆盖）

• 6×6 cm

• 6×12 cm

• 12×6 cm（窄长分离胶）

• 12×12 cm 大板标准胶（科研主力）

梳子体系（带回收梳）

常规分析梳

• 0.75mm 24/30 齿：10–15 μl（细条带、高分辨率）

• 1.0mm 16/20 齿：18–25 μl（日常通用）

• 1.5mm 12 齿：30–35 μl（低浓度样品）

【关键实验功能】回收专用宽梳

• 4/6/8 齿大孔梳 1.5mm

• 上样量 40–45 μl

• 可切胶回收的组合

HE120 真正优势（科研）

• 大板胶路径长 → 分离度最高

• 可慢跑、可快跑、可回收、可精细分型

• 所有毕业论文、期刊实验、载体构建

3. HE-220 / HE220W（高通量筛查槽）

凝胶尺寸

• 15×12 cm 超大胶板

• 可同时放两块 12×12 胶
总通量 192 孔

梳子 & 上样

• 96 齿密梳 0.75mm：8–12 μl

• 48/600 齿长梳 1.0mm：15–20 μl

实验定位

只适合：大批量筛查、基因型普查、样本初筛
禁止用于：回收、高精度分离、大片段分析

三、核心重点：什么时候用恒压？什么时候用恒流？（实验原理级）

1. 核酸电泳【100% 恒压】

底层原理

琼脂糖胶属于多孔分子筛

• 电压决定迁移速率

• 电流只代表整体热量

如果核酸用恒流：
随着电泳升温 → 缓冲液电阻下降 → 电压持续暴跌
结果：条带歪斜、拖尾、前后不齐、弥散、跑不动

三套槽标准恒压参数（实验 SOP）

1. HE90 小胶快速鉴定
120–150V 恒压 10–20 min
适用：短片段 PCR、菌检、质粒筛查

2. HE120 标准科研胶（常用）
常规分离：100–130V 20–35min
切胶回收专用慢速程序：80–100V 35–50min（条带舒展、不挤带）

3. HE220 高通量批量跑胶
80–110V 恒压 30–50min
（双胶电流大，必须限流 1000mA）

4. 大片段 2k–10kb 精细分离
50–70V 低压慢跑
防止大片段撕裂、拖尾

2. 蛋白湿转 VE586PRO【100% 恒流】

底层原理

转膜是电荷驱动蛋白迁移
电流 = 带电粒子数量 = 蛋白转移量
必须恒定，电压自动浮动

标准转膜参数

-<30kDa）：200–300mA 15–25min

• 中分子蛋白：200mA 30min

• 大分子蛋白（>70kDa）：120–150mA 过夜慢速湿转

四、实验最重要：片段大小 → 凝胶浓度选择（新手最容易错）

琼脂糖凝胶浓度实验标准

0.8% 胶

• 分离范围：5kb–20kb 大片段、基因组、质粒

• 特点：孔大、跑得快、分辨率低

1.0% 胶【实验室万能通用胶】

• 分离：800bp–6kb

• PCR、质粒、酶切、鉴定 90% 实验用它

1.2% 胶

• 分离：300bp–3kb

• 普通短片段 PCR、杂带区分

1.5% 胶

• 分离：100bp–1.5kb

• 微小片段、突变检测、高分辨分型

2.0% 高浓度胶

• 分离：50bp–800bp

• 仅用于短片段精细区分

五、完整制胶实验 SOP（含禁忌）

1. TAE/TBE 选择（实验区别）

TAE（主流 95% 实验）

• 优点：回收效率高、条带平整

• 缺点：长时间跑胶发热快

• 适用：所有常规实验、切胶回收用 TAE

TBE

• 优点：耐热、适合长时间慢跑

• 缺点：抑制酶活性，回收不能用 TBE

• 适用：高分型、超长时间电泳

2. 凝胶凝固标准

• 常温凝固 20–30min

• 禁止吹风、禁止暴晒、禁止提前拔梳

• 拔梳必须垂直，否则孔歪、漏样、条带弯曲

3. 胶厚控制（对应梳子）

• 0.75mm 薄胶：条带细、好看、适合拍照

• 1.5mm 厚胶：载量大、适合低浓度、回收

六、上样量实验标准（防过载、防拖尾核心）

通用黄金原则

1. 片段越大，上样量越少（大片段极易拖尾）

2. 浓度越低，可适当多加

3. 回收孔最大容忍 45μl

4. 密梳绝对不能超量，立刻弥散

过载后果（实验室 90% 人踩坑）

• 条带肥胖、拖尾、弥散

• 相邻孔串样

• 无法定量、无法回收

七、实验室仪器电泳全程判断标准（怎么看跑胶是否正常）

正常电泳现象

1. 刚开始电流缓慢上升（正常发热）

2. 溴酚蓝直线平整下移

3. 无气泡大量翻滚

4. 孔缘清晰不扩散

异常即时判断

1. 条带歪、波浪：电压不稳 / 胶未凝好 / 孔破损

2. 底部拖尾：样品过载、蛋白杂质多、DNA 降解

3. 整体弥散：胶浓度不对、电压过高、过热

4. 孔内亮团：样品没沉降、盐离子过高

5. 条带前后不齐：必须恒压，之前用了恒流

八、缓冲液更换标准（实验级细节）

1. 新配胶必须新缓冲液

2. 连续跑 2 次必须更换

3. 出现升温快、电流乱、条带歪 → 立刻更换

4. 回收实验必须全新 TAE（否则回收污染、效率极低）

九、EPS1500 电源高级实验设置（老手专用）

1. 恒压 + 最大电流限制 1000mA（推荐默认设置）
防过热、防击穿、防变形

2. 多块胶同时跑：电流自动叠加，限流

3. 跑胶程序可分段：

￮ 前段低压整孔

￮ 后段高压分离
适合疑难样本、易弥散样本

十、核酸 VS 蛋白两套实验完整总结（对照表）

十一、实验室新手最完整避坑清单

1. 核酸绝对不能恒流

2. 回收只用 HE120 + 大孔梳 + 新 TAE

3. 大片段必须低压慢跑

4. 密梳严禁超 10μl，必弥散

5. 双胶跑胶一定要限流

6. TBE 绝对不做回收

7. 胶未凝固严禁上样

8. 上样必须沉孔，不能飘样

9. 转膜不能用恒压，转不均匀

10. 缓冲液反复使用会导致所有条带异常

苏州阿尔法生物提供的最终实验选型总结】

1. 仅教学、简单 PCR、少量样本 → HE90

2. 科研、毕业论文、酶切、克隆、回收、精细实验 → HE120

3. 批量筛查、公司检测、高通量样本 → HE220

4. 蛋白 WB 实验 → 必配 VE586PRO+EPS1500 恒流模式