产品信息
生化试剂-CD4细胞分选磁珠 可用于对细胞进行磁性标记。标记后，将细胞悬液加载到分选柱上，该柱放置在含分选器的磁场中。 磁性标记的CD4+细胞被保留在柱内。未标记的细胞贯穿其中而被去除。将分选柱从磁场中移除之后，洗脱磁性标记的CD4+细胞作为阳性选择的细胞。
· 高磁珠结合力
· 简便、快捷
· 高纯度、高得率、高活率
使用方法
试剂和仪器要求
1.缓冲液: （pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA，2-8C)。
2.分选柱和分选器
3.(可选)用于流式细胞术分析的荧光偶联CD4抗体。
4.(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
5.(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
当处理抗凝的外周血液时，应通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)。
在处理组织时，用标准的制备方法制备单细胞悬浮液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300g 离心10min，去除上清。
3.每 10⁷细胞，用80μL缓冲液重悬。
4.每 10⁷细胞，用20μLCD4磁珠混匀。
5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.(可选)加入染色抗体，在2-8℃避光孵育5分钟。
7.每10⁷细胞，加入1-2mL缓冲液洗涤，300g离心10min，弃上清。
8.用 500μL 缓冲液重悬细胞。
三、磁性分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM: 500μL；xL: 3 mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM: 3X500μL；xL: 3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。（xM: 1mL；xL: 5 mL）
7.(可选)为了提高标记细胞的纯度，洗脱部分可以在第二个xM或xL柱上富集。使用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁选过程。
保存方法
在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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