SDS-PAGE 胶染色介绍

一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较二、考马斯亮蓝染色CBB染色液0.5%考马斯亮蓝G250或R25040%甲醇10%乙酸将CBB溶于甲醇中并不停的搅拌15min。加入乙酸与ddH2O脱色液：30%甲醇10%乙酸染色方法：1.在摇床上染色30min.2.脱色至蛋白点或条带清晰可见3.ddH2O洗3-5次三、胶体考马氏亮蓝染色ColloidalCoomassieStaining（Cambridgecentreforporteomics）sensitivity=~100ng1.固定：...

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双向电泳的样品的制备及电泳实验步骤

样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰；3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于变性状态。根据这一原则，样品制备需要四种主要的试剂：离液剂(chaotropes),主要包括尿素（Urea）和硫脲（thiourea）；表面活性剂（sufactants）...

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免疫荧光标记法

免疫荧光标记法1、细胞膜上的免疫荧光检测法间接标记法1)制备单细胞悬液；2)细胞计数，取出1×106个细胞于试管中；3)用台盼蓝染色计活细胞数，要求活细胞数90～95%；4)在试管中加入一抗，（剂量按照说明书的要求），孵育30～60分钟；5)PBS洗涤1～2次，1500rpm，离心3分钟，弃上清；6)加入二抗，孵育20～30分钟；7)PBS洗一次，1500rpm，离心3分钟，弃上清;8)加300μlPBS，上机检测(若不能及时上机检测，可加1ml1%多聚甲醛固定，可放置1周)...

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细胞凋亡检测及分子生物学检测步骤

细胞凋亡检测及分子生物学检测步骤：1、细胞DNA含量分布（由细胞DNA降解方式检测细胞凋亡）收集已固定的单细胞悬液约5×105~1×106/ml；离心除去固定液，3mlPBS重悬细胞;使用低速离心机1500rpm离心，5分钟，弃去PBS；加PI染液1ml，室温避光20分钟；调整细胞浓度5×105/ml；上机检测。2、磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡1)常规制备单细胞悬液,用PBS洗两次.(若为全血要先溶血),取约5×106个细胞，1500rpm离心,弃上清,用400μl1×B...

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琼脂糖核酸电泳介绍

琼脂糖核酸电泳步骤1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30ml）；3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；4.室温下30~45分钟后凝胶全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1m...

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