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实例应用:MDCK细胞的生物反应器微载体培养方法

 发布时间:2022-05-05 点击量:272

MDCK细胞属于动物细胞一般采用Cytodex 作为微载体Cytodex 主要有两个系列 即:Cytodex 和 Cytopore ,其中 Cytodex 1适合大多数的贴壁细胞。

采用Cytodex 微载体的优势主要有以下几点:

1. Cytodex 微载体的表面比较适宜细胞的粘附和延展。

2. 优化后的大小和密度对于细胞悬浮较为有利,适宜细胞的生长和高产。

3. 这类细胞的细胞基质具有一定的生物惰性,可以减少搅拌培养过程中的剪切力损害。

4. Cytodex 微载体具有较好的可放大性。试验证明,良好的培养环境下采用搏旅悬浮细胞培养生物反应器可达 15,000 L产量规模,而采用贴壁细胞微载体培养生物反应器可达 6,000 L 左右的规模。

微载体

MDCK细胞的生物反应器微载体培养方法主要有以下几个步骤:

一、微载体的前处理:

pH7.4PBS缓冲液将Cytodex系列微载体浸泡3~24H;反复清洗后用高压进行灭菌,冷却。并用含牛血清的培养基清洗后并加入同体积的培养基备用。2

二、MDCK种子细胞的解冻复苏:

取出冻存中MDCK细胞,置于37℃-39℃恒温水浴振荡器进行解冻复苏,再植入细胞培养瓶中进行细胞培养。

三、细胞的转瓶扩培

当细胞培养瓶中的细胞生长到90%密度时用细胞消化液处理细胞,并接入摇瓶进行分瓶培养,当细胞生长到同样密度时,用培养基稀释接入生物反应器进行扩培。

四、生物反应器微载体培养:

MDCK细胞接种可以依照 比例为2-25g微载体/L(培养基)5-50个细胞/载体的比例接入生物反应器中进行扩大培养。具体详尽参数可以根据相关的《胞培养操作说明》进行设定调整。

五、病毒的感染接种:

生物反应器培养的MDCK细胞90%微载体表面形成致密层后,应当停止搅拌,微载体沉淀于生物反应器的地步是更新培养基,按照TPCK胰酶1-20μg/ml、病毒感染复数0.01-1接种病毒培养2h后,补充培养基与原来的量相一致

六、病毒收获

当病毒接种10H后,需要每小时取样观察细胞病变效应及CPE值,当CPE值大达80%以上时,即可进行病毒收获、分析测定等操作环节,结合分析结果与相关《检验规程》执行下一步操作


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