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抗原修复技术概述

 发布时间:2022-06-17 点击量:175

抗原修复技术主要用于增强免疫组织化学检测中的信号。下面介绍一下抗原修复方法和修复技巧。
一、抗原修复方法
固定是在免疫组织化学过程中进行的一个关键步骤,以保持组织形态。然而,这种方法也可能对免疫组织化学产生不利影响,因为它经常改变蛋白质生物化学并掩盖感兴趣蛋白质的表位。因此,一抗无法与蛋白质结合,导致信号强度低。这种掩蔽效应可能是由表位中氨基酸的交联或无关但存在于表位附近的肽的交联引起的。这会改变抗原的构象或静电荷。在抗原修复过程中,这种掩蔽被逆转,从而可能发生抗原与表位之间的结合。
二、抗原修复技巧
抗原修复基于几个变量,例如目标抗原、抗体、组织类型以及固定的持续时间和方法。通常,多克隆抗体在不使用抗原修复方法的情况下可能会更好地工作,因为它们识别多个表位。然而,单克隆抗体依赖于对单个特定表位的识别才能发挥作用。正在使用多种策略来检索抗原。有些方法就像改变抗体稀释剂中阳离子的pH值或浓度一样简单,这也可以改变抗体及其表位的亲和力。


在表位被部分掩盖的情况下,可以在尝试其他抗原修复方法之前增加一抗孵育。然而,必须首先优化孵育时间、温度和浓度的这些参数。目前使用两种主要方法来检索抗原。
1.蛋白酶诱导表位修复 (PIER)
在这种方法中,不同的酶用于恢复抗原和表位之间的结合。这个过程应该通过切割形成表位的肽来工作。然而,PIER成功率低,在此过程中可能会破坏组织形态和抗原。
2.热诱导表位修复 (HIER)
        在该技术中,热量用于逆转交联并恢复原始和三级表位结构。该方法针对每种组织、固定方法和感兴趣的抗原进行了优化。
在这种情况下,使用微波炉、压力锅、蒸锅、高压釜或水浴提供热量。这种方法比PIER方法有更高的成功率。在此过程中,样品在更换缓冲液之前会短时间加热。
某些实验室使用温度设置为 60°C 的水浴,然后将载玻片在修复溶液中孵育过夜。
      如果切片在高温下从载玻片上脱落(可能用于骨骼、软骨和皮肤),此类技术可能很有用。在这种方法中,载玻片在加热之前先冷却。HIER 受时间、温度、缓冲液和 pH 值的影响,该方案是通过反复试验确定的。
三、抗原修复的局限性是什么?
抗原修复过程通常需要将样品牢固地粘附在载玻片上。此外,这种方法对于某些样品通常过于苛刻,例如低温恒温器组织和酒精固定组织。还需要优化每个样品的温度、时间和 pH 值;在决定每个样品的最佳条件之前,需要测试这些条件。

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