欢迎进入苏州阿尔法生物实验器材有限公司!
技术文章
首页 > 技术文章 > 生命科学研究中常用的几种实验方法

生命科学研究中常用的几种实验方法

 更新时间:2023-02-06 点击量:776

生命科学研究时生物学的分支,下面介绍几个关于生命科学常用的几种实验方法:
一、BCA法测蛋白质浓度

实验原理:BCA(bicinchoninic acid,二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合,并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm有强烈的光吸收,且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此可用于蛋白质浓度测定。

二、免疫组化

原理:免疫组织化学,即免疫组化,是应用免疫学基本原理一-抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、翻、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原《多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。常用于免疫组化实验的有组织石蜡切片、组织冰冻切片、细胞爬片或细胞涂片。

三、RNA提取(Trizol法)

Trizol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

四、RT-PCR

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在最佳条件下进行。

实验步骤主要包括:1、RNA的提取;2、反转录合成cDNA;3、PCR扩增;4、产物的电泳和结果的测定。

五、实时荧光定量PCR(Q—PCR)(Real-time Quantitative PCR )

利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

阈值:是循环开始3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,设定在扩增曲线指数增长期。

C(t)值:荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增循环次数。
 

苏州阿尔法生物14年专注于实验室仪器、科研仪器、实验耗材、生物试剂的供应,致力于打造实验仪器、试剂和耗材一站式采购服务平台。