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蛋白质电泳常用试剂配制方法

 更新时间:2023-06-13 点击量:2695

蛋白质电泳常用试剂配制方法如下:

一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

3×SDS-PAGE loading buffer10ml
1M Tris-Hcl (PH 6.8)1.5ml
SDS0.6g
BPB(溴酚蓝)30mg
甘油(丙三醇)3ml
去离子水5.5ml

1、将除BPB以外的药品溶解。SDS常温下很难溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,进行溶解;

2、把溶好的buffer分装到1.5ml的离心管中,1ml/管,常温放置;

3、使用前,每管加入30µL巯基乙醇。

注意事项:巯基乙醇为危险品,加入的过程在通风橱中完成,并且带好手套。

二、10×PBS的配制

0.1M PBS(10×PBS)1L
NaH2PO4.2H2O2.83g
Nacl85g
Na2HPO4.12H2O28.98g

1、用去离子水将以上药品进行溶解;(溶解的非常慢,可能需要过夜)

2、调PH值到7.2,用0.4µm的滤膜过滤。常温保存;

3、工作时用的是1×PBS。

三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

1.5M Tris-Hcl250ml
Tris45.425g

1、用200ml去离子水将Tris溶解。

2、用浓盐酸调PH值到8.8。

3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

4、0.4µm的滤膜过滤,常温保存。

注意事项:Tris的缓冲能力很强,调PH值时,费些时间,但不要调过。

四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

1M Tris-Hcl250ml
Tris30.275g

1、用200ml去离子水将Tris溶解;

2、用浓盐酸调PH值到6.8;

3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml;

4、0.4µm的滤膜过滤,常温保存。

五、30%丙烯酰胺的配制

30%丙烯酰胺250ml
丙烯酰胺72.5 ml
BIS甲叉丙烯酰胺2.5 ml

1、把药品用去离子水溶解后定容到250ml;

2、用滤纸过滤,放在棕色瓶子中,4℃保存。

注意事项:两种药品有毒性,配制过程要带手套和口罩。

六、10%SDS的配制

1.1g SDS加入10ml去离子水进行溶解;

2.分装到1.5ml离心管中,-20℃保存。

七、10%过硫酸铵的配制

1.1g 过硫酸铵加入10ml去离子水进行溶解。

2.分装到1.5ml离心管中,-20℃保存。

八、5×SDS-PAGE电泳缓冲液的配制

5×SDS-PAGE电泳缓冲液1L
Tris15.1g
Glycine(甘氨酸)94g
SDS5g

将以上药品用去离子水溶解后定容到1L,常温保存。工作时用的是1×SDS-PAGE电泳缓冲液。

九、考马斯亮蓝R-250染色液的配制

1、往1g考马斯亮蓝R-250中加入250ml异丙醇,在磁力搅拌器上搅拌六小时以上;

2、加入650ml去离子水,磁力搅拌器搅拌过夜;

3、再加入100ml冰醋酸进行溶解,磁力搅拌器搅拌;

4、在通风橱内用滤纸进行过滤。常温保存。染色液只能反复用两次。

注意事项:在磁力搅拌器上搅拌时,要把容器封口。

十、脱色液的配制

脱色液1L
醋酸(冰乙酸)100ml
乙醇(无水乙醇)50ml
去离子水850ml

常温保存。

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