蛋白质电泳常用试剂配制方法如下:
一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制
3×SDS-PAGE loading buffer | 10ml |
1M Tris-Hcl (PH 6.8) | 1.5ml |
SDS | 0.6g |
BPB(溴酚蓝) | 30mg |
甘油(丙三醇) | 3ml |
去离子水 | 5.5ml |
1、将除BPB以外的药品溶解。SDS常温下很难溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,进行溶解;
2、把溶好的buffer分装到1.5ml的离心管中,1ml/管,常温放置;
3、使用前,每管加入30µL巯基乙醇。
注意事项:巯基乙醇为危险品,加入的过程在通风橱中完成,并且带好手套。
二、10×PBS的配制
0.1M PBS(10×PBS) | 1L |
NaH2PO4.2H2O | 2.83g |
Nacl | 85g |
Na2HPO4.12H2O | 28.98g |
1、用去离子水将以上药品进行溶解;(溶解的非常慢,可能需要过夜)
2、调PH值到7.2,用0.4µm的滤膜过滤。常温保存;
3、工作时用的是1×PBS。
三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制
1.5M Tris-Hcl | 250ml |
Tris | 45.425g |
1、用200ml去离子水将Tris溶解。
2、用浓盐酸调PH值到8.8。
3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml。
4、0.4µm的滤膜过滤,常温保存。
注意事项:Tris的缓冲能力很强,调PH值时,费些时间,但不要调过。
四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制
1M Tris-Hcl | 250ml |
Tris | 30.275g |
1、用200ml去离子水将Tris溶解;
2、用浓盐酸调PH值到6.8;
3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml;
4、0.4µm的滤膜过滤,常温保存。
五、30%丙烯酰胺的配制
30%丙烯酰胺 | 250ml |
丙烯酰胺 | 72.5 ml |
BIS甲叉丙烯酰胺 | 2.5 ml |
1、把药品用去离子水溶解后定容到250ml;
2、用滤纸过滤,放在棕色瓶子中,4℃保存。
注意事项:两种药品有毒性,配制过程要带手套和口罩。
六、10%SDS的配制
1.1g SDS加入10ml去离子水进行溶解;
2.分装到1.5ml离心管中,-20℃保存。
七、10%过硫酸铵的配制
1.1g 过硫酸铵加入10ml去离子水进行溶解。
2.分装到1.5ml离心管中,-20℃保存。
八、5×SDS-PAGE电泳缓冲液的配制
5×SDS-PAGE电泳缓冲液 | 1L |
Tris | 15.1g |
Glycine(甘氨酸) | 94g |
SDS | 5g |
将以上药品用去离子水溶解后定容到1L,常温保存。工作时用的是1×SDS-PAGE电泳缓冲液。
九、考马斯亮蓝R-250染色液的配制
1、往1g考马斯亮蓝R-250中加入250ml异丙醇,在磁力搅拌器上搅拌六小时以上;
2、加入650ml去离子水,磁力搅拌器搅拌过夜;
3、再加入100ml冰醋酸进行溶解,磁力搅拌器搅拌;
4、在通风橱内用滤纸进行过滤。常温保存。染色液只能反复用两次。
注意事项:在磁力搅拌器上搅拌时,要把容器封口。
十、脱色液的配制
脱色液 | 1L |
醋酸(冰乙酸) | 100ml |
乙醇(无水乙醇) | 50ml |
去离子水 | 850ml |
常温保存。
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