欢迎进入苏州阿尔法生物实验器材有限公司!
技术文章
首页 > 技术文章 > 分子生物学常用溶液配制

分子生物学常用溶液配制

 更新时间:2023-11-23 点击量:585


一、分子生物学常用贮存液的配制

1.30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】将 29g 丙怖酷胶和 1gN ,N’- 亚甲双丙怖酷胶溶于总体积为 60ml  的水中。加热至 37校溶解之, 补加水至终体积为 100ml。用滤器(0.45μm 孔径) 过滤除菌,查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0,置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙怖酷胶具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。 称量丙怖酷胶和亚甲双丙怖酷胶时应戴手套和面具。可认为聚丙怖酷胶无毒, 但

也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙怖酷胶和双丙怖酷胶通常含有一些金属离子, 在丙怖酷胶贮存 液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后

用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间,丙怖酷胶和双丙怖酷胶会缓慢转化成丙怖酷和双丙怖酸。 2.40%丙烯酰胺


【配制方法】把380g 丙烯酰胺(DNA 测序级)和20gN,N’- 亚甲双丙烯酰胺溶 于总体积为 600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理,

但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。

【注意】见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定。 3.放线菌素D 溶液

【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中, 1:10 稀释贮存液,

用 100%乙醇作空白对照读取 OD440 值。放线菌素 D(分子量为 1255)纯品在水 溶液中的摩尔消化系数为 21,900,故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处 的吸光值为 0.182,放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中, 保存于-20℃。 【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内 操作, 而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。  药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测  量贮存液在 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度,这类制品便可用于

抑制自身引导作用。

4.0.1mol/L 腺苷三磷酸(ATP )溶液

【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0, 用蒸馏水定容 1ml,分装成小份保存于-70℃

5.10mol/L 乙酸酰溶液

【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后过滤除菌。 6.10%过硫酸铵溶液

【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中, 该溶液可在 4℃保 存数周。

7.BCIP 溶液

【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4- 氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于 10ml 100% 的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃

8.2×BES 缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[N ,N-双-2-氨基乙磺酸 、1.6g NaCl 和 0.027gNa2HPO4 ,室温下用 HCl 调节该溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸馏水定容至 100ml,用 0.22μm滤器过滤除菌, 分装成 小份,保存于-20℃。

9.1mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在 200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2 · 6H2O,用 0.22μm 滤器过滤除菌, 分装成 10ml 小份贮存于-20℃。

 

【注意】制备感受态细胞时, 取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml,用 Nalgene 滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至 0℃。

10.2.5mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2·6H2 O,用 0.22μm 滤器过滤除菌 , 分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

11.1mol/L 二硫苏糖醇(DTT )溶液

【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2)溶解 3.09g DTT,过滤除 菌后分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。

12.脱氧核苷三磷酸( dNTP )溶液

【配制方法】把每一种 dNTP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右,用微量移  液器吸取0.05mol/l Tris 碱分别调节每一dNTP 溶液的pH 值7 . 0(用 pH 试纸检测 ), 把中和后的每种 dNTP 溶液各取一份作适当稀释, 在下表中给出的波长下读取光

密度计算出每种 dNTP 的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为 50mmol/L 的

dNTP,分装成小份贮存于-70℃。


13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

【配制方法】在800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O), 在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0(约需 20g NaOH    颗粒)然后定容至 1L,分装后高压灭菌备用。

【注意】EDTA 二钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能全溶解。 14.溴化乙锭( 10mg/ml 溶液)

【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其全溶 解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

【注意】小心: 溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性, 使用含有这种染料的溶液时 务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。

15.2×HEPES 缓冲盐溶液

 

【配制方法】用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g

Na2PO4·2H2O 、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES ,用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05,

再用蒸馏水定容至 100ml。用 0.22μm滤器过滤除菌, 分装成 5ml 小份, 贮存于- 20℃。

16.IPTG 溶液

【配制方法】IPTG 为异丙基硫代- β-D-半乳糖苷(分子量为 238.3),在 8ml 蒸 馏水中溶解 2g IPTG 后, 用蒸馏水定容至 10ml,用 0.22μm滤器过滤除菌, 分装 成 1ml 小份贮存于-20℃。

17.1mol/L 乙酸镁溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁, 用水定容至 1L 过滤除菌。 18.1mol/L MgCl2 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至 1L,分装成小 份并高压灭菌备用。

【注意】MgCl2 极易潮解, 应选购小瓶(如 100g)试剂, 启用新瓶后勿长期存放。 19. β- (BME )溶液

【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液,应装在棕色瓶中保存于 4℃。

【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。

20.NBT 溶液

【配制方法】把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃。

21.酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L Tris ·HCl(pH7.6)抽提几次以平 衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的 0.01mol/l Tris ·HCl(pH=7.6)液层,  保存于 4℃。

【注意】酚腐蚀性很强, 并可引起严重灼伤, 操作时应戴手套及防护镜, 穿防护 服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清

洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

22.10mmol/L ( PMSF )溶液

【配制方法】用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存 于-20℃。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液(100mmol/L)。

【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收 后有致命危险。 一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被

PMSF 污染的衣物应予丢弃。

 

PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加快, 且 25℃的失活速率高 于 4℃。pH 值为 8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 85min,这表明  将 PMSF 溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。 23.磷酸盐缓冲溶液(PBS )溶液

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4 和 0.24g KH2PO4,用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L,在 15lbf/in2(1034 × 105Pa) 高压下蒸气灭菌 20min。保存于室温。

24.1mol/L 乙酸钾(pH=7.5 )溶液

【配制方法】将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 纯水中,用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至

7.5 后加入纯水定容到 1L,保存于-20℃。

25. 乙酸钾溶液( 用于碱裂解)

【配制方法】在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水,即

成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。

26.3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 pH7.0 )溶液

【配制方法】在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节 pH 值至 5.2 或用稀乙酸调节 pH 值至 7.0,加水定容到 1L,分装后高压灭菌。

27.5mol/L NaCl 溶液

【配制方法】

在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L,分装后高压灭菌。 28.10%十二烷基硫酸钠( SDS )溶液

【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS,加热至 68℃助溶, 加入几滴 浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2,加水定容至 1L,分装备用。

【注意】SDS 的微细晶粒易扩散, 因此称量时要戴面罩, 称量完毕后要清除残留 在称量工作区和天平上的 SDS ,10%SDS 溶液无须灭菌。

29.20×SSC 溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠, 加入数滴 10mol/l NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。

30.20×SSPE 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2 O 和 7.4g EDTA, 用 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.4(约需 6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至 1L,分装 后高压灭菌。

31.100% C2HCl3O2溶液

 

【配制方法】在装有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水,形成的溶液含有 1 0 0 %(M/V)

TCA。

32.1mol/L Tris 溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 碱,加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值。

pHHCl          7.4 70ml                     7.6 60ml                           8.0 42ml

 应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。 【注意】如 1mol/L 溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的 Tris。

尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值,但仍可向大多数厂商购 得合适的电极。

Tris 溶液的 pH 值因温度而异, 温度每升高 1℃ , pH 值大约降低 0.03 个单位。例 如: 0.05mol/L 的溶液在 5℃ 、25℃、和 37℃时的 pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。 33.Tris 缓冲盐溶液( TBS )(25mmol/l Tris )

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱,加入 0.015g

酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4,用蒸馏水定容至 1L,分装后在

151bf/in2(1.034 × 105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min,于室温保存。

更多生物试剂、实验室仪器、实验耗材请进入苏州阿尔法生物网站。