干细胞培养基是细胞培养的核心成分,其作用是为干细胞提供必要的营养、生长因子、pH缓冲和无菌环境,以维持细胞的存活、增殖和分化。
提供基础营养:
氨基酸、糖类、维生素:为细胞代谢提供能量和原料。
无机盐:维持渗透压和离子平衡。
支持细胞生长与增殖:
血清(如FBS胎牛血清):提供生长因子、激素、脂蛋白等,促进细胞贴壁和增殖。
重组生长因子:诱导干细胞自我更新,抑制分化。
维持pH稳定:
通过缓冲系统中和代谢产生的酸性物质,保持培养基pH在7.2~7.4范围内。
防止污染:
添加抗生素预防细菌污染(注意:长期使用可能影响细胞状态)。
培养基本身需无菌,通常经过过滤除菌。
调节渗透压:
通过电解质浓度控制渗透压,避免细胞因渗透压失衡而破裂或皱缩。
支持特定细胞需求:
根据干细胞类型(如胚胎干细胞、间充质干细胞、神经干细胞)添加特异性成分。
二、干细胞培养基存放要求:
1. 未开封培养基的存放
低温保存:
基础培养基应存放于4℃冰箱,避免反复冻融。
添加血清或生长因子后的培养基需根据成分调整:
含血清的培养基:短期可存于4℃,长期(>1周)需-20℃冷冻,使用前解冻。
无血清培养基:建议小量分装,4℃保存(部分需-20℃)。
避光保存:
某些成分(如谷氨酰胺、生长因子)对光照敏感,需用锡箔纸包裹或存放在深色容器中。
保质期限制:
基础培养基开封后建议1个月内用完,含血清的培养基最好2周内使用。
2. 配制后培养基的存放
无菌操作:
配制时在超净台内完成,避免微生物污染。
分装至无菌容器(如培养瓶、离心管),密封后标记配制日期。
短期存放:
4℃保存,不超过1周(含血清培养基)。
无血清培养基可存于4℃或按说明书要求冷冻。
长期存放:
冷冻,使用前需缓慢解冻。
3. 特殊注意事项
避免反复冻融:
冻融会导致血清蛋白变性、生长因子失活,建议分装成单次用量后冷冻。
禁止阳光直射:
存放位置远离窗户或强光,防止光敏成分降解。
定期检查:
观察培养基是否浑浊、沉淀或变色,若出现异常则丢弃。
