一种通过改造CHO 细胞提升抗体产量的新技术

丙酮酸羧化酶是细胞质和线粒体代谢途径的重要元素，可以有效促进能量代谢。在CHO细胞中过表达酵母胞质丙酮酸羧化酶(PYC2)，可以增加丙酮酸流向TCA循环。增强的PYC2表达导致丙酮酸通量增加，从而使乳酸积累减少多达4倍，并显着增加细胞密度和培养寿命。有了这个结果，与亲本细胞相比，工程细胞的抗体表达显着提高了70%，产品质量也有所提高（约3倍）。通过PYC2工程改造提升细胞性能，在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和细胞能量代谢方面具有均高于亲代细胞的各种优势。PYC2工程改造原理和方法在补...

查看更多

核酸酶切反应原理及注意事项

A载体和外源DNA的酶切一、实验目的学习和掌握核酸的酶切操作原理；通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA。二、实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。绝大多数限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割，产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'...

查看更多

质粒DNA的提取实验方法和步骤

质粒DNA的提取实验方法和步骤一、实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤。二、实验原理从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞：分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠(SDS)和TritonX-100可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或TritonX-100处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性...

查看更多

PCR反应的基本原理与实验技术

一、实验目的：掌握PCR反应的基本原理与实验技术二、PCR反应实验原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸-变性-退火-延伸的循环可以重复多次...

查看更多

琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法

一、实验目的：通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。二、实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速度...

查看更多